【求助】 细胞复苏后不贴壁了

最新回复

• u76mp (2015-3-17 20:28:51)

  
  取出的细胞是黄色的，以前去的其他批次的细胞是红色。这批是以前的师兄冻存的。

• wzqzy (2015-3-17 20:29:07)

  
  复苏细胞状态不好跟你冻存时的操作有直接关系。而且细胞的传代数越多，即细胞越老，越禁不起低温的折腾。复苏后，细胞有个休眠期，大约7-14天不等。只要不死，你就慢慢养着。突破了某个时间点，你会发现细胞又神奇的康复了。但要等到细胞状态良好，传2代以上再做实验。尤其是流式、RNA干扰之类的。千万不能急，细胞状态不好就做的话，就等于在烧钱。
  

• WHO? (2015-3-17 20:29:24)

  
  我发现你们实验室很怪，先是用生化培养箱培养细胞，这又不除冻存液就直接培养，DMSO是有毒的，细胞肯定活不了。
  你们实验室是不是刚组建。

• veiwu (2015-3-17 20:29:55)

  
  其实不做额外要求的话，细胞复苏后都可以直接培养，待第二天贴壁后再换掉含有DMSO的培养基是完全可行的。
  现在你的细胞不贴壁，你可以试一试先去掉DMSO。
  你说细胞冻存液的颜色和以前不一样，那估计是培养基不一样，建议你用和配置冻存液的培养基复苏细胞。。。

• tewank (2015-3-17 20:30:40)

  这次我养的细胞贴壁也出现了问题，我怀疑是我用的冻存液是先配好备用的，请问冻存液只能即配即用吗？
  

• u76mp (2015-3-17 20:30:57)

  今天扔了两管复苏了三四天的细胞，老师说是已经死了。。。痛苦。。第三次复苏，加了血清，看明天情况咋样了。。。。或许要放多几天看看能不能长得好啦。。。

• prettygirl@ (2015-3-17 20:31:24)

  我的离心去了dmso，可是今天第二天也不贴壁啊，怎么回事呢？

• zhenxin (2015-3-17 20:31:48)

  QUOTE:

  原帖由 wzqzy 于 2015-3-17 20:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  复苏细胞状态不好跟你冻存时的操作有直接关系。而且细胞的传代数越多，即细胞越老，越禁不起低温的折腾。复苏后，细胞有个休眠期，大约7-14天不等。只要不死，你就慢慢养着。突破了某个时间点，你会发现细胞又神奇的康复了。但 ...

  细胞在第几代冻存比较合适？如果细胞不贴壁是因为细胞在休眠状态，而不生长，需要时间复苏，那次期间需要换液吗？怎么换液才不会把悬浮的细胞换掉呢？
  谢谢~!

• viviwang1987 (2015-3-17 20:32:06)

  真的有可能是没有离心导致残留的DMSO杀死了细胞

• gogo (2015-3-17 20:33:04)

  我感觉也是冻存的问题

• 33号 (2015-3-17 20:33:36)

  
  为什么没有离心啊？