【求助】hela细胞中小黑点

最新回复

• yizhi (2016-3-10 17:17:09)

  刚复苏就出现了，从其他实验室借过来的，别人养的都正常，培养基不浑浊，黑点老鼠出现在我们实验室。养原代心肌细胞没有，证明超净台培养基没问题，其他操作一样，原代都没黑点，细胞系总是有，从别人实验室借过来复苏也出现黑点，无语了

• babybabe (2016-3-10 17:17:27)

  不影响生长的话就没有问题吧？

• yizhi (2016-3-10 17:17:45)

  QUOTE:

  原帖由 babybabe 于 2016-3-10 17:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  不影响生长的话就没有问题吧？

  那影响结果，不靠谱啊

• shenkunjie (2016-3-10 17:18:00)

  支原体污染呀

• caihong (2016-3-10 17:18:17)

  1、Q:  支原体污染对细胞有什么危害？
  
  A:  支原体污染后，不会使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细 胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞收到多方面潜在影响，如引起细胞变形， 影响 DNA 合成，抑制细胞生长等，以致影响实验数据的可信度。
  2、Q:  支原体污染有什么特征？
  
  A: 细胞状态变差,生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生 浑浊。细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细 胞漂浮，完全死亡。具体特征请见附件 2。
  3、Q:  细胞培养时，显微镜下的小黑点是什么？
  A: 支原体污染后，细胞凋亡坏死，释放出大量碎片，看起来就像小黑虫子。
  
  4、Q:  细胞通过何种途径感染支原体？
  
  A: 支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（某些支原体在人体是 正常菌群如口腔中的支原体）、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材 的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染等等，由于支原体大小为 0.1~0.8 um，无细 胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um），血清中也可能含有支原体。
  5、Q:  支原体污染如何检测？
  
  A:  利用支原体具特殊专一性之 primers，经由 PCR 反应来复制支原体 DNA。所用 primers 来自支原体的 conserved 16S-23S rRNA 序列，由于此段序列依支原体种类不同而不同， 因此可依所复制之 DNA 大小及其 restriction  fragment 大小差异来作侦测与鉴定支原体
  （具体方法见附件）。
  6、Q:  如何清除支原体？
  
  A:  由于市场同类产品都为抗生素类，对细胞本身也会产生一定影响，而且有反复发 作的风险，吉锐生物推出的 MycoplasmaOUT™ Treatment，活性成分为抗菌肽，经多方测试表明对 大部分细胞无毒害作用，因其独特的作用原理，支原体不会对其产生耐药性，并且其作 用时间短，在三天内就可杀灭支原体，并自动降解成氨基酸，不会对细胞造成二次污染。
  7、Q:  为什么在培养细胞前要加入MycoplasmaOUT™ Prevention？
  A：由于支原体污染后能够进入细胞，而MycoplasmaOUT™ Prevention不能够进入细胞内也就不能杀灭已经进入细胞的支原体，而这部分细胞死亡时会释放其内部的支原体，需要MycoplasmaOUT™ Prevention来杀灭新释放出的支原体，以防止新生细胞受到污染。
  
  8、Q:  所谓的黑胶虫污染？
  A:培养细胞发现小黑点现象很严重，原来对“黑胶虫”一说嗤之以鼻，认为那不过是自欺欺人的借口，觉得怎么也不会发生在自己身上。但是真的就碰上了：细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。
  上述现象很像所谓的“黑胶虫”。
  我感觉实际是支原体感染以后细胞生长不好造成的碎片和感染原虫（现在看来是些胞外囊泡）的混合体。这种现象的直接原因是支原体等原虫感染，间接表象是小黑点，被以讹传讹成为了“黑胶虫”。
  光镜下看不到支原体，但是可以看到支原体感染的终末现象——细胞凋亡坏死，释放出大量碎片，看起来就像小黑虫子。
  查找类似的帖子——很多人是更换血清后出现这种问题；
  说空气传播的可能是一个培养箱的人都用了同一种血清，而不是可以通过培养箱空气传播；感染最可能是牛源性的支原体，通过产道或血行感染。
  所谓“细胞生长不受影响”，其实是污染的严重程度不高而已；
  支原体污染严重就出现细胞大量空泡形成，细胞间空旷地带出现大量黑点，细胞最终凋亡、坏死，漂起来。有些国产血清写着建议灭活，其实是挂羊头卖狗肉，那个56度30分钟更多的是为了杀杀支原体的。实际上还有很多杀不死的。但可以降低产品支原体等微生物污染风险。用阿奇霉素杀支原体，小黑点可以得到抑制，不过我想根治就很难了，而且处理时间很长，至少一个星期。
  以上是自己个人总结的一点看法。建议不要总拿子虚乌有的“黑胶虫”来说事。多考虑看不到的支原体，不要还停留在培根时代——只相信自己眼睛看见的。

• redbutterfly (2016-3-10 17:18:33)

  很可能是支原体污染，如果比较重要的话，用支原体去除试剂，很方便的
  

• wiwi (2016-3-10 17:18:50)

  血清或者操作

• 3648755 (2016-3-10 17:19:50)

  应该是支原体污染，细胞中有空泡样
  

• nn255 (2016-3-10 17:20:10)

  太不清晰了，应该是污染了的，培养液浑浊不？

• yizhi (2016-3-10 17:20:39)

  不混

• iii_ii (2016-3-10 17:21:24)

  QUOTE:

  原帖由 yizhi 于 2016-3-10 17:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  不混

  就是支原体污染，相信我，用一下MycoplasmaOUT™ Treatment第二天就能看到细胞状态明显变好

• lyxsqs (2016-3-10 17:22:06)

  QUOTE:

  原帖由 iii_ii 于 2016-3-10 17:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  就是支原体污染，相信我，用一下MycoplasmaOUT™ Treatment第二天就能看到细胞状态明显变好

  有试用的？

• woshituzhu (2016-3-10 17:22:21)

  我们实验室也有这种黑点，终于知道怎么回事了！

• yizhi (2016-3-10 17:22:46)

  QUOTE:

  原帖由 woshituzhu 于 2016-3-10 17:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我们实验室也有这种黑点，终于知道怎么回事了！

  怎么回事呢？我看就是培养基的问题，换新鲜的就好了，HELA代谢旺盛，排除培养箱外，营养不够就出现黑点

• DDD (2016-3-10 17:23:01)

  营养不够出现小黑点？次级代谢产物？
  

• ququer787 (2016-3-10 17:27:10)

  我养A549，前一阵细胞表面全是黑点，师姐跟我说是黑胶虫～后来上汉恒官网申请了一只抗支原体试用装，细胞立马回光返照！给你个链接吧，请叫我雷锋cuturl('http://www.hanbio.net/cn/services/item/614')