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碱性苦味酸法测定肌酐（二）
关键词：农兽药残留 环境标准样品 进口标准品 中检所标准品碱性苦味酸法测定肌酐（二）
【临床意义】
血液肌酐经肾小球滤过后，肾小管既不重吸收，也不分泌，滤过多少，排泄多少。在肾脏疾病初期，血清肌酐通常不升高，只有在肾脏病变较为严重(GFR下降至正常的50％以下)时才会升高。在正常肾脏血流量的条件下，血肌酐值如升高至176～353μmol/L，提示中度至严重的肾损害。血肌酐测定对晚期肾脏疾病的临床意义较大。在反映肾小球滤过率下降方面，血肌酐比血尿素的灵敏度低，但血肌酐受饮食、运动、激素、蛋白质代谢等因素的影响较少，所以诊断特异性比血尿素高。
尿肌酐排泄量增高见于甲状腺功能减退、肝脏疾患、糖尿病、肢端肥大症、巨人症、某些消耗性疾病、发热以及饥饿等。尿肌酐排泄量减少见于肾脏功能不全、甲状腺功能亢进、瘫痪、贫血、伤寒、结核、破伤风等消耗性疾病及肌肉萎缩和肌肉营养不良等。
【注意事项】
1．碱性肌酐苦味酸复合物的吸收峰在485nm，过量苦味酸离子存在于反应液中，在波长低于500nm时会产生明显的吸收。
2．反应温度以15～25℃为宜，10℃以下，会抑制Jaffé反应；温度升高，空白、标准、测定的吸光度不成比例地增高。
3．呈色后标准管吸光度较稳定，但测定管吸光度随时间延长而增加，可能与血标本中存在的非特异性物质有关，故加显色剂后在30分钟内完成比色为宜。
4．苦味酸纯度要求高，若含有杂质，则使试剂空白吸光度增加而影响测定结果。
5．血清(浆)标本若当天不能测定，在冰箱中可保留3天，若需长时间保存，宜于-20℃保存。
【评价与思考】
1．肌酐的测定方法主要有化学法、酶法和高效液相色谱法。化学法一直沿用Jaffé反应原理及多种改良方法，如：漂白土吸附法、动力学法、双pH法等，包括碱性苦味酸比色法、速率法等。高效液相色谱法特异性高，准确性好，一般作为参考方法。目前应用于临床
的方法主要有以．Jaffé反应为原理的碱性苦味酸速率法以及酶法。
2．本实验方法属．Jaffé反应法，特异性不高，维生素C、丙酮酸、葡萄糖、乙酰乙酸、丙酮、胍类、蛋白质等均能与苦味酸反应生成红色化合物。这类化合物称为假肌酐。假肌酐存在会导致结果偏高，红细胞中假肌酐物质较多，约有60％，血浆或血清约20％，尿液约5％，故肌酐测定不宜使用全血标本。血清和血浆需制备无蛋白滤液后再测定。
3．肌酐含量在1320μmoL／L以内线性良好。回收率受无蛋白滤液的pH影响，滤液pH在3～4．5时，回收率为85％~90％，pH在2以下时，回收率接近100％。
4．苦味酸与肌酐的作用时间 在反应最初20秒内，血清中快速反应假肌酐类物质迅速与苦味酸反应。慢速反应假肌酐类物质一般在80～120秒内才开始与苦味酸反应。这样，在20~80秒，出现“窗口期”。在窗口期内以肌酐与苦昧酸的呈色反应占主导地位。有研究者发现“窗口期’’的上限为60秒。如果选用25~60秒为测定时间，可以有效地排除干扰，提高了分析的特异性和准确性，肌酐浓度与吸光度变化呈良好的线性关系，并简化了去蛋白的烦琐步骤。自动生化分析仪苦味酸速率法测肌酐即利用此特性。
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