[讨论帖]养平滑肌细胞及内皮细胞的群友请进

最新回复

• 北风那个吹 (2011-12-10 11:18:17)

  
  竟然还有卖人脑血管平滑肌细胞的：
  cuturl('http://www.sciencellonline.com/products/1100.htm')
  价格也不是太贵，$480/1ml，>>5 x 10^5 cells

• wu11998866 (2011-12-10 11:18:43)

  我在养脐静脉内皮细胞，想和大家交流

• utt0989 (2011-12-10 11:21:10)

  养的是大鼠胸主动脉内皮细胞。很好长。附一张免疫荧光照片给大家看看。

  
  85535433.snap.jpg

• 北风那个吹 (2011-12-10 11:21:46)

  大家只简单留这么一个联系方法不好，至少说说自己培养什么，在哪个城市，这样也许会有人对你有兴趣，会PM你。
  能谈谈大家成功的经验和失败的教训那是泽被后世、恩泽万代。
  哈哈，期待大家！

• lixi559 (2011-12-10 11:22:36)

  养平滑肌，最近作了细胞鉴定，肌球蛋白，这是阳性吗？应该是胞桨着色。请高手指点

  
  70485860.jpg

• dragonkilly (2011-12-10 11:23:46)

  
  我在养肺动脉平滑肌细胞,用的是大鼠的,取材简直是苦不堪言,各位大侠有没有这方面的经验?!

• lixi559 (2011-12-10 11:24:19)

  哪位战友有平滑肌细胞电镜照片啊，我做了1次，等了3个星期，结果不理想，看不见肌丝，密班，密体，文献上的图片很模糊！很苦啊！
  哪位战友能有平滑肌细胞action的图片啊，有文献说能看到棕色的肌丝，免疫组化能看到棕色的肌丝，会这么精确？！

• 北风那个吹 (2011-12-10 11:25:18)

  
  最近培养平滑肌细胞时遇到最大的问题是将其剪成1mm3的小块后怎么才能以0.5cm的间距均匀摆置于瓶底，我用剪刀剪后发现会得到很多块块，每块以点点大，用镊子夹也不可能一次夹一块，而且会粘在镊子上，很多时候放不下来，郁闷，大家可有这方面的经验？

• 园丁## (2011-12-10 11:25:36)

  
  用玻璃棒，没必要太均匀。用新刀！最好用刀切！

• qqq111 (2011-12-10 11:26:38)

  最近培养平滑肌细胞时遇到最大的问题是将其剪成1mm3的小块后怎么才能以0.5cm的间距均匀摆置于瓶底，我用剪刀剪后发现会得到很多块块，每块以点点大，用镊子夹也不可能一次夹一块，而且会粘在镊子上，很多时候放不下来，郁闷，大家可有这方面的经验？
  
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  我用的是牙科探针，很老的那种，其实就是一根小木棒（筷子粗细），一端插一根细钢丝（要插紧），钢丝弯一点，就ok了。 用前高压消毒。组织块剪好后，加一，两滴培养基，用吸管吸到瓶子里面，顺壁流下， 然后用探针一块块摆好就ok,我每次贴都还可以。
  祝早日养出细胞。

• loli (2011-12-10 11:26:57)

  
  我的经验是：在青霉素瓶里剪碎，D-Hanks冲洗1~2次，将上面漂浮的像粘液一样的浮快吸掉，这样小块就很干净，用弯头吸管种到培养瓶里就好摆了，用弯头吸管抹一下就可以了。

• nn255 (2011-12-10 11:28:14)

  [color=Black正准备养人脐静脉内皮细胞（从ATCC购得细胞株），细胞还没有到货！期待中！
  本人搞中医药复方的研究

• yes4 (2011-12-10 11:30:27)

  我才开始原代培养人腹主动脉平滑肌细胞，在一个小木块上用手术刀切血管可以很容易的得到1-2mm的血管块，贴壁时采用接种针（细菌培养时也用过的，不过前面的铁丝弯成L型）将血管块移入培养瓶，还蛮好用的，大家可以试试。

• 北风那个吹 (2011-12-10 11:30:59)

  
  大家可以在这里都谈谈所用的培养液和血清的类型，我用Gibco的DMEM高糖及四季青公司的胎牛血清，浓度15％，正在等待结果。

• duoduo (2011-12-10 11:31:24)

  
  我用20的血清，也用过25的，15的可能稍偏小。传代时不可锐减！！
  dmem中加了hepes，ph好象稳定多了，原代细胞对ph要笱希?荒芗睿?取材过程慢了，损伤大了，以后再好的条件也不行，就会失败！细胞先天不足啦！
  个人的1点体会，见笑！

• BOSS2011 (2011-12-10 11:31:55)

  我用消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞的过程。与各位分享，也请指教。
  用dmem配0.2%的1型胶原酶[用20的血清的dmem配可能更好，有类似文献}，分装于青霉素小并，每并2-3ml。1只免的胸主动脉置于1并消化液中消化，消化约10几个小时{消化程度的把握要体会}，离心后，接种{若见细胞量大，成功把握大}，绝对静置3天{没必要看，看多了无益}，8天可传代。

• lixi559 (2011-12-10 11:32:22)

  我已经做了一个多月的大鼠主动脉内皮细胞的培养，已经试过消化法和机械刮法，效果不理想。消化法用的是有0.1％的的胶原酶、0.25％的胰蛋白酶以及胶原酶加胰蛋白酶三种消化，消化后还试着刮血管，对消化的时间也进行过比较30分钟、一个小时等都做过，对消化下来的东西不满意，养在培养瓶里好几天都不贴壁，杂质特多，可能是消化过了，希望能得到各位老师的指点

• 北风那个吹 (2011-12-10 11:32:58)

  还有兄弟们，今天我贴块法养的平滑肌细胞，等了5个小时翻转时还是浮起一大片，不知道什么原因，大家分析分析呢，看有谁碰到过的。

• 一叶 (2011-12-10 12:14:21)

  块大了，不易贴。愈小愈易贴。开始加的培养基少点，能盖上块就行。不必怕细胞差营养，这时细胞在适应新环境，代谢较低。翻转时动作要慢而清。
  浮起一大片，我还没碰到。起初我干涸3h，后来干涸缩短为1h，浮起也不多。
  祝好运！

• 北风那个吹 (2011-12-10 12:14:56)

  感谢一叶兄，我自己也在反思，可能原因我想大致就这些，
  一个是块太大了，1立方毫米这个度我始终把握不准，我一直不改像他们做肝细胞培养那样放在培养皿中用剪刀一阵乱剪，总觉得这样剪出来的块太小，没有1立方毫米，而且极不整齐，我都是慢慢的看清楚一段一段逐渐像剪纸片一样的剪的。
  第二就是培养基放的多了一些，像水一样漫过去，所到之处全部漂浮，不得已再次倒置，过几个小时再试，还是一样，都反复到了第二天。
  第三我的那瓶盖子旋的紧了可能会有些影响
  还有就是，我在考虑我的培养瓶都几年前用的，拿来洗，底面不光整，或许影响块贴上去。
  最后我考虑的就是，平滑肌层的正反及内外膜处理的干净程度或许也有影响吧？
  
  唉，现在做一次都要花上四五个小时，痛心啊，希望其他刚开始做朋友能有所借鉴，有所留心。