【求助】pet32a融合表达

最新回复

• lgm (2013-8-16 17:13:17)

  我用pet32a这个载体融合表达一个大约5kb的蛋白。用IPTG诱导后在25KB附近有了新的条带。但是作为对照的pet32a诱导前后似乎没有什么变化，这是怎么回事呢？按理说应该有个trA的硫氧还蛋白亚？
  请教各位高手了！
  
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  你说的是kb还是kD？
  如果对照的pet32A在诱导前后没变化，那别的就不要谈了。

• xueyouzhang (2013-8-16 17:15:32)

  
  不好意思 打错了 是KD
  但是为什么重组菌能表达呢？

• pencil菲 (2013-8-16 17:16:33)

  用pET32a表达，根据我过去的经验，很少能见到载体本身表达的，我做了很多次，只有一次见到载体诱导后有Thioredoxin融合蛋白的表达。所以我的意思是，这是很正常的。

• 00无名指00 (2013-8-16 17:16:55)

  
  我所做的pet32a对照，全部都有TRX表达，诱导后应该表达才正常，如果TRX都不表达，后面的蛋白表达的确难以让人理解，呵呵

• jkobn (2013-8-16 17:18:07)

  我也做pet32a的融合表达，对照都有TRX表达。本来在别的质粒上表达是包涵体的目的蛋白在32a几乎全都是可溶表达了，但是活力检测基本没有活力，请问各位有没有切除标签以后可以显著增加活性的经验啊？

• 66+77 (2013-8-16 17:18:25)

  
  我想冒昧问一句，TRX蛋白有多大呢？

• jkobn (2013-8-16 17:19:36)

  11kD

• bring (2013-8-16 17:22:21)

  
  16-17kd吧？

• ladyhuahua (2013-8-16 17:24:18)

  
  这么小的蛋白你做SDS-PAGE的时候看的到吗？一般我们做的时候Marker都只有5个而不是7个，你的是不是也跑出去了？