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【求助】LTQ ORBITRAP 液质联用仪定量分析氨基酸代谢物线性差

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-5-19 17:49    作者: 晶晶亮    来源: 分析测试百科网

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【求助】LTQ ORBITRAP 液质联用仪定量分析氨基酸代谢物线性差
我实验室质谱是LTQ orbitrap, 主要用来做蛋白组学，最近有客户要做氨基酸代谢物定量分析，我建立分析方法，采用一级MS全扫，提取离子定量，做标准曲线（不含基质）发现6个物质只有一个线性在99%以上，其余在96-99之间，标曲6个点最高2ug/ml，最低2ng/ml, 在高浓度区域的点（2ug,1ug）总是在线性下面，响应偏差，形成往上抛物线状，高中低浓度的精密度均很好。是不是浓度过高造成离子抑制，做了些改进，在样品和流动相中均提高甲酸浓度，并在离子源部分提高气流，电压等，线性并未改善。我的样品采用5%DMSO溶解（含甲酸， 不好溶解，所以用DMSO）, 流动相采取乙腈-水（含甲酸）。我看到很多文章在用此方法标曲线性均在99以上，可是我总是达不到。是不是离子阱不适合分析这类样品，或者确实是非线性，要用加权最小二乘进行处理。各位有什么建议，做哪些改进能提高线性呢？先行谢过。
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  • woshi (2015-5-19 17:49:36)

    换流动相试试？比如用甲醇和水（含甲酸），或者干脆缩小线性范围吧

  • 晶晶亮 (2015-5-19 17:49:53)

    流动相可以换换试一下，还有把2ug点去掉试试

  • whitesheep (2015-5-19 17:50:16)

    你设的浓度点范围是不是有点宽了？

  • xevin (2015-5-19 17:50:32)

    浓度点范围有点宽了，把2ug点去掉也好。

  • 晶晶亮 (2015-5-19 17:50:47)

    我把流动相换成甲醇和水（含甲酸），去掉2ug的点，有的检测信号增加有的下降，线性还是基本在95-99之间，抛物线状，不解高浓度信号为何总是下降

  • xuuuu (2015-5-19 17:51:02)

    线性范围有点宽了

  • zbboom (2015-5-19 17:51:36)

    你是ft的扫描？还是ltq的扫描？建议修改一下分析时间

  • 晶晶亮 (2015-5-19 17:51:51)

    FT扫描，LTQ精度不够，范围太宽了，改为5-500，线性良好

  • yes4 (2015-5-19 17:52:11)

    orbi能进的离子数目很有限，用FT来定量的话很容易就饱和了

  • is2011 (2015-5-19 17:52:27)

    LTQ orbi  这玩意  跟tof 一样 线性窄了点，要做定量不要范围太宽了。

  • is2011 (2015-5-19 17:52:55)

    同样是orbi，为何QE的定量能力非常好，可以5个数量级，跟串接一样，求教

  • ujne (2015-5-19 17:53:50)

    呵呵，QE的英文指标是3个半数量级！我觉得5个数量级可能是在目标化合物SIR的模式下，即一级的选择离子情况下可能可以达到5个数量级。但我看QE很多应用文献，针对目标化合物，也就2-3个数量级，且在前年美国ASMS会议上热电的QE推荐会上举例的应用也是不到3个数量级。不解

  • ujne (2015-5-19 17:54:12)

    总结一下,就是说LTQ-Orbi仪器中，Orbi本身线性不好，而LTQ线性也不好，所以LTQ-Orbi无论在哪种工作模式下线性可能均不太宽喽。而QE当针对目标化合物做SIR时,即Q开始发挥作用时，此时经过四级杆选择后进入Orbi的东西很干净，因此有可能做到更宽的线性，而做未知物全扫描时，基质非常复杂，而Orbi的容量又是有限的，所以线性会差。
    其实QTOF也是一样，做full scan时差不多4个数量级左右，当做TOF-MRM模式时也是能到5个数量级

  • kulee (2015-5-19 17:54:47)

    看来用orbitrap做定量proteomics 也是任重而道远啊。

  • qianqin1977 (2015-5-19 17:55:03)

    浓度过高了，去掉高点就可以了。

  • xue258 (2015-5-19 17:55:33)

    空间电荷效应太强，浓度不要做太高，2-500ng/mL就够了，另外曲线增加权重1/x拟合
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