【求助】大肠杆菌发酵

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• NBA (2016-2-16 16:55:00)

  1.诱导1、2个小时溶解，各种可能都有，比如，其代谢产物对自身细胞有破坏作用，产生溶菌酶，发酵条件不合适等，
  2.大肠发酵0D做到100多很正常也很普遍，培养基及补料是实现高密度发酵的主要因素，这个慢慢摸索吧，主要补料。补料速度，补料配方等。
  3.诱导一小时后不长，大多是培养条件没控制好，比如非产物（垃圾）产生的太多一直菌的生长，比如葡萄糖浓度太高，产生葡萄糖效应等。
  
  多看文献的同时在学学基本的理论，代谢过程，慢慢摸索吧，另外摇瓶不溶，不代表发酵罐不溶，摇瓶和发酵罐完全是两码事。祝顺利。

• #甜# (2016-2-16 16:55:15)

  会不会你的菌里参杂了溶源菌？有感染么？

• summerxx (2016-2-16 16:55:32)

  不太像，摇瓶小试做的没问题。

• ero11 (2016-2-16 16:55:50)

  1.诱导后溶菌，首先考虑是不是操作上出了问题。或者发酵过程参数波动很大，例如压力，PH等的影响；
  2.诱导以后OD不长，有可能是诱导剂的用量太高，还有你诱导的温度和诱导剂的加入方法有时候也会有影响；
  3.生长多久以后开始诱导？罐体是否有死角没有处理干净？
  4.诱导时间把握不对

• yayya (2016-2-16 16:56:06)

  一般溶菌现象可能是噬菌体污染了，参照噬菌体污染的解决办法。这个问题解决后，后面就不是问题了

• 嗅嗅 (2016-2-16 16:56:27)

  QUOTE:

  原帖由 ero11 于 2016-2-16 16:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  1.诱导后溶菌，首先考虑是不是操作上出了问题。或者发酵过程参数波动很大，例如压力，PH等的影响；
  2.诱导以后OD不长，有可能是诱导剂的用量太高，还有你诱导的温度和诱导剂的加入方法有时候也会有影响；
  3.生长多久以后开始诱导？罐 ...

  您好，请问您所说的操作上的问题指的是？  
  压力基本没变化，PH在7左右。有时候升到7.2、7.3。
  IPTG终浓度0.1-0.15，直接倒进去的。
  生长四五个小时开始诱导的。
  

• 嗅嗅 (2016-2-16 16:56:56)

  我们OD能做到240，补料培养
  
  =========================
  
  太猛了吧  怎么搞得啊

• 嗅嗅 (2016-2-16 16:57:22)

  QUOTE:

  原帖由 NBA 于 2016-2-16 16:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  1.诱导1、2个小时溶解，各种可能都有，比如，其代谢产物对自身细胞有破坏作用，产生溶菌酶，发酵条件不合适等，
  2.大肠发酵0D做到100多很正常也很普遍，培养基及补料是实现高密度发酵的主要因素，这个慢慢摸索吧，主要补料。补料速度，补 ...

  我该如何解决这问题呢？  能不能指点一下方向？

• moonlight (2016-2-16 16:57:41)

  可能污染了烈性噬菌体了

• whitesheep (2016-2-16 16:57:55)

  是不是转速太大了，注意防止污染，把瓶子烘烤一下再用，湿热灭菌有时候不彻底