【求助】PNPG法测a-葡萄糖苷酶活性实验

最新回复

• seagate (2016-2-10 20:48:15)

  我也做这个酶，是做固定化。我觉得应该是这个酶活性在自然环境中损失很快，直观反映就是需要时间延长。我做固载的时候也是这样，甚至放置3d后才有黄色。对于这种酶活易损失的酶，楼主一开始分装的时候就应该直接往瓶子里加缓冲液，倒至离心管（或其他容器）里，稀释至所需浓度（一般按U表示），-20℃冷冻。要用的时候可以放到烘箱里（50℃左右）冻融，一有全部融化赶紧用，这样才能保证酶活损失最小。其他的酶活损失就不是人为所能及的了。至于瓶子上所标示的我个人觉得也只有250U能用吧~

• seagate (2016-2-10 20:49:24)

  还有，底物水解产生的产物NPG只有在碱性条件下才能显色，最后加碳酸钠一是停止反应，二是将体系调为碱性。楼主所加的0.2M貌似不给力啊，试试1M的，我是这么做的。

• 66+77 (2016-2-10 20:49:45)

  
  昨晚上放在37度恒温箱放了一夜，结果变成淡黄色的了，OD值也升高了，但是最高的也就0.3左右。这是为什么呢？难道是酶活不行？恳请各位有谁知道这是神马情况啊？快被折磨疯了！金币可以给更多的哈！

• 66+77 (2016-2-10 20:50:05)

  QUOTE:

  原帖由 seagate 于 2016-2-10 20:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我也做这个酶，是做固定化。我觉得应该是这个酶活性在自然环境中损失很快，直观反映就是需要时间延长。我做固载的时候也是这样，甚至放置3d后才有黄色。对于这种酶活易损失的酶，楼主一开始分装的时候就应该直接往瓶子里加缓 ...

  太感谢啦！感动啊终于有肯定的答复了。确实是呢，有的要放2-3天才有黄色。看来我还要再买一批酶，然后按照你的方法分装一下。请问除了这种方法外，还有没有别的比较好的可以体外抑制a-葡萄糖苷酶的模型呢？我还要做那个蔗糖和酶反应后，用血糖试剂盒测OD值的方法，但是貌似也得用到这个葡萄糖苷酶，晕啊！

• 66+77 (2016-2-10 20:50:22)

  QUOTE:

  原帖由 seagate 于 2016-2-10 20:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  还有，底物水解产生的产物NPG只有在碱性条件下才能显色，最后加碳酸钠一是停止反应，二是将体系调为碱性。楼主所加的0.2M貌似不给力啊，试试1M的，我是这么做的。 ...

  嗯哪，多谢啦！最近也在买试剂盒想用葡萄糖氧化酶法测，希望有好的结果。

• seagate (2016-2-10 20:50:45)

  QUOTE:

  原帖由 66+77 于 2016-2-10 20:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  太感谢啦！感动啊终于有肯定的答复了。确实是呢，有的要放2-3天才有黄色。看来我还要再买一批酶，然后按照你的方法分装一下。请问除了这种方法外，还有没有别的比较好的可以体外抑制a-葡萄糖苷酶的模型呢？我还要做那个蔗糖和 ...

  还有一种测糖苷酶的方法就是和葡萄糖氧化酶联用，记得Talanta上发了一篇，具体没印象了，肯定是看过，你查查吧。但貌似不如这个方法来的容易，并且两种酶的话引入的影响因素更多，不好控制。现在做α酶的少，β的多就是因为这个原因吧。

• 66+77 (2016-2-10 20:51:05)

  QUOTE:

  原帖由 seagate 于 2016-2-10 20:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  还有一种测糖苷酶的方法就是和葡萄糖氧化酶联用，记得Talanta上发了一篇，具体没印象了，肯定是看过，你查查吧。但貌似不如这个方法来的容易，并且两种酶的话引入的影响因素更多，不好控制。现在做α酶的少，β的多就是因为这个原 ...

  嗯哪，多谢啦！最近也在买试剂盒想用葡萄糖氧化酶法测，希望有好的结果。

• seagate (2016-2-10 20:51:28)

  嗯哪，多谢啦！最近也在买试剂盒想用葡萄糖氧化酶法测，希望有好的结果。...

• seagate (2016-2-10 20:51:45)

  后面要做的第一个实验就是动力学参数测定，有次可以得出酶底比，楼主加油吧，这个酶的确不好做。

• 2541 (2016-2-10 20:52:05)

  我也准备做这个模型，楼主方法能不能给俺分享下啊，不胜感激

• seagate (2016-2-10 20:52:27)

  QUOTE:

  原帖由 2541 于 2016-2-10 20:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我也准备做这个模型，楼主方法能不能给俺分享下啊，不胜感激

  Food Chem.  Investigation of α-glucosidase inhibitory activity of wheat bran and germ 里面有具体的方法，不过是用酶标仪做的，方法都一样，量不同而已，可以参考下。

• seagate (2016-2-10 20:52:52)

  嗯哪，多谢啦！最近也在买试剂盒想用葡萄糖氧化酶法测，希望有好的结果。...
  
  ==============================================================================
  
  后面要做的第一个实验就是动力学参数测定，有次可以得出酶底比，楼主加油吧，这个酶的确不好做。

• 66+77 (2016-2-10 20:53:17)

  后面要做的第一个实验就是动力学参数测定，有次可以得出酶底比，楼主加油吧，这个酶的确不好做。...
  
  ================================================
  
  多谢指导！哈哈 真是太感谢了！看来真得耐下性子好好做啊！

• 66+77 (2016-2-10 20:53:43)

  Food Chem.  Investigation of α-glucosidase inhibitory activity of wheat bran and germ 里面有具体的方法，不过是用酶标仪做的，方法都一样，量不同而已，可以参考下。...
  
  ===========================================================================================================
  
  我们这里只有一台迷你型酶标仪，还有一台紫外分光光度计。要是方便的话可否麻烦传一下这篇文献啊？哎，条件所限，查不到外文的啊中文的好多文献重复不出来......多谢多谢啊！

• seagate (2016-2-10 20:54:13)

  QUOTE:

  原帖由 66+77 于 2016-2-10 20:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  Food Chem.  Investigation of α-glucosidase inhibitory activity of wheat bran and germ 里面有具体的方法，不过是用酶标仪做的，方法都一样，量不同而已，可以参考下。...
  
  ============================= ...

  迷你型？预订波长是多少？

• 66+77 (2016-2-10 20:57:39)

  QUOTE:

  原帖由 seagate 于 2016-2-10 20:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  迷你型？预订波长是多少？

  酶标仪只有405、450、492、550、620nm这几个滤光片，平常都是用405nm测OD值。我也不知道是否可以传文献，要不发我邮箱吧！zhaofen1320@163.com 多谢多谢哈

• prettygirl@ (2016-2-10 20:57:58)

  我做的是β-葡萄糖苷酶，貌似我看的所有的文献最后在终反应时加的都是1M的，加完后会变黄，根据活性的高低颜色也有所不同，对照就是显淡黄色的！

• 66+77 (2016-2-10 21:04:44)

  我做的是β-葡萄糖苷酶，貌似我看的所有的文献最后在终反应时加的都是1M的，加完后会变黄，根据活性的高低颜色也有所不同，对照就是显淡黄色的！...
  
  ===========================================================================================================
  
  但是β-葡萄糖苷酶和a-葡萄糖苷酶方向不一样吧，降糖的话是不是不能用β-葡萄糖苷酶啊？我之后用1M后，得经过好长时间（至少过夜）才能变色呢，不是立马就能看到黄色的。

• eric930 (2016-2-10 21:05:15)

  Food Chem.  Investigation of α-glucosidase inhibitory activity of wheat bran and germ 里面有具体的方法，不过是用酶标仪做的，方法都一样，量不同而已，可以参考下。...
  
  ===================================================
  
  谢谢，我已经找了方法，正在尝试，不过还是很感谢了。。。

• seagate (2016-2-10 21:05:40)

  但是β-葡萄糖苷酶和a-葡萄糖苷酶方向不一样吧，降糖的话是不是不能用β-葡萄糖苷酶啊？我之后用1M后，得经过好长时间（至少过夜）才能变色呢，不是立马就能看到黄色的。...
  
  ===========================================================================================================
  
  降糖？你说的是药物作用？倒是只有α-葡萄糖苷酶抑制剂被研究作为二型糖尿病的治疗药物，β葡萄糖苷酶更多是用来水解纤维二糖或者是人参皂苷