【求助】如何克隆启动子

最新回复

• XYZQ (2014-10-26 21:58:57)

  QUOTE:

  原帖由 粉色萤火虫 于 2014-10-26 21:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我克隆出来了一个基因的全长，想克隆基因的启动子，想问下有没有哪位大侠克隆过启动子的，大家交流一下，用试剂盒的也可以，不是用试剂盒也可以的。麻烦大家了！ ...

  是植物还是动物？

• wzqzy (2014-10-26 21:59:16)

  
  有很多根据已知序列扩增上下游未知序列的方法，Tail PCR,SEFA PCR等等。
  

• 粉色萤火虫 (2014-10-26 21:59:39)

  QUOTE:

  原帖由 XYZQ 于 2014-10-26 21:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  是植物还是动物？

  克隆盐藻的，是植物的

• 粉色萤火虫 (2014-10-26 21:59:58)

  QUOTE:

  原帖由 wzqzy 于 2014-10-26 21:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  有很多根据已知序列扩增上下游未知序列的方法，Tail PCR,SEFA PCR等等。
  

  我想用热不对称PCR，但是不知道那个随机简并引物（AD）如何来的

• XYZQ (2014-10-26 22:00:17)

  那个就用原作者论文或者别人已经发表的论文中的就可以。不过据说Tail PCR效果要差些
  

• 粉色萤火虫 (2014-10-26 22:01:12)

  我看到的文献都是说TAIL-PCR，效果如何好，简便灵敏度高，请问你克隆过启动子吗？

• XYZQ (2014-10-26 22:01:37)

  QUOTE:

  原帖由 粉色萤火虫 于 2014-10-26 22:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我看到的文献都是说TAIL-PCR，效果如何好，简便灵敏度高，请问你克隆过启动子吗？

  用SEFA PCR吧

• wanglaoshi (2014-10-26 22:02:08)

  
  直接在NCBI上查出该基因组promoter序列，提取genomic DNA，根据序列设计引物再做普通的PCR不就行了吗

• 粉色萤火虫 (2014-10-26 22:03:21)

  QUOTE:

  原帖由 wanglaoshi 于 2014-10-26 22:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  直接在NCBI上查出该基因组promoter序列，提取genomic DNA，根据序列设计引物再做普通的PCR不就行了吗

  我是克隆未知启动子的

• ladyhuahua (2014-10-26 22:03:43)

  现在有全基因组序列信息的物种不多吧！

• yapuyapu (2014-10-26 22:04:01)

  哦，这个我不太清楚。因为最近我也要克隆启动子，恰好我的是人的，有全基因组序列咧。

• yapuyapu (2014-10-26 22:04:46)

  请问你这个基因是从全基因组DNA扩出来的吗？好扩不好扩？引物你有加酶切位点吗？

• 粉色萤火虫 (2014-10-26 22:05:06)

  
  是要从全基因组DNA中扩的，所以要提取总RNA，最近按照刘光耀老师的一篇文献来做热不对称PCR，今天刚把引物发出去，还没有扩呢，期待啊

• 粉色萤火虫 (2014-10-26 22:06:45)

  我按照站友的文献设计引物的，他的给定的引物中有NotI酶切位点的

• gogo (2014-10-26 22:07:20)

  
  宝生物有个步移试剂盒，用来做这个挺好用，前一段时间师姐用它克隆启动子，一下子就出来了

• eric930 (2014-10-26 22:08:08)

  
  我也打算开始做启动子  我使用LA--PCR in vitro cloning kit  可我不知道该怎么选择酶，你现在还在做启动子吗? 能不能传授下经验啊?