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【求助】新到细胞冻存后复苏,大量细胞死亡
【求助】新到细胞冻存后复苏,大量细胞死亡
请教大家问题,我买的新的细胞株,刚到后,传代一次,进行冻存。冻存20天后,复苏细胞,结果大量的细胞死亡。我一直沿用的冻存方法及试剂,从没出过问题。我猜想是不是细胞刚到后,传代培养一代,这之间用的是原细胞培养液,但二代以后的细胞培养基就用我们的培养基了,而这时候已经冻存了,复苏以后的培养基也是我们的,是不是它还没有完全适应现在的培养基而造成的大量死亡呢?传几代以后在冻存,是不是就不会有这种现象了呢?还是DMSO浓度高了,293T一直用的10%,区别就是这次是新细胞。
因为我没有冻过刚到的细胞的经历,请教大家什么原因?
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最新回复
dreaming (2015-2-24 12:41:49)
wanglaoshi (2015-2-24 12:43:56)
969 (2015-2-24 12:44:21)
QUOTE:
冻存细胞过程:提前配好冻存液4度存放将细胞消化好,1500rmp离心后,弃上清,用冻存液将沉淀重悬起来,动作轻柔。
传代用的培养基就是养细胞用的10%DMEM
cbou876 (2015-2-24 12:44:38)
保种前细胞状态必须很好才行
nikonun (2015-2-24 12:44:55)
我今天刚复苏了293T,你也是293T?应该没什么大问题,DMSO标准的10%没问,然后90%全培养基,冻存我都没有用冻存盒,就是81格纸盒子,第二天转液氮!你冻存的细胞一支大约有多少?还有293T不需要双抗。那个与你的冻存液的存放没关系,你时间短配好了就在超净台里放着一会也没事,我们基本上不往冰箱里放,太麻烦。还有我记得要是放冰箱应该是-20吧,具体的我忘了,因为没放过几次
nikonun (2015-2-24 13:50:21)
969 (2015-2-24 13:50:45)
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谢谢你。我发现这个细胞也很好消化,复苏的时候我都不会离心的tianmei001 (2015-2-24 13:51:09)
QUOTE:
你不应该继续用原来的培养基样养着。来的时候说明书应该好好看看,那上面有详细的说明
nikonun (2015-2-24 13:51:38)
QUOTE:
复苏是不要离心的,对293细胞影响很大【求助】新到细胞冻存后复苏,大量细胞死亡