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【求助】Tricinr-SDS-PAGE中配制缓冲液是用Tris-HCL...
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Tricinr-SDS-PAGE中配制缓冲液是用Tris-HCL,还是用Tris base?
我用的是Tris base,现在做胶的时候,老是不凝固。请教各位到底是什么原因会造成这种情况啊?AP和TEMED都是新鲜的。
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最新回复
tuuu2 (2014-4-18 15:16:21)
tris-Hcl或tris base 都可以,关键是配制的凝胶缓冲液PH值要准,
胶不凝的原因如下:
1,AP或TEMED的量不够,可增加TEMED的量
2,试剂质量比较差,使用电泳级的试剂
3,AP和TEMED失活(AP一般不超过两周),配置使用新鲜的贮存液
4,聚合时温度太低,应将凝胶置于室温
或者检索本版:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/search?words=%B2%BB%C4%FD&c=0&mode=and&bid=65&username=&age=0&t=1&o=0&limit=20&action_search=+%CB%D1+%CB%F7+')
applebook=213 (2014-4-18 15:16:46)
我想可能也是AP的原因吧。虽然是新配的,但是固体的好像有点受潮,溶解的时候也没有听到所谓的声响,换成新的再试试,有结果了我再和大家交流。
applebook=213 (2014-4-18 15:17:10)
另外想问一下,浓缩胶凝的很慢,2个小时了还不好,而且胶收缩了很多,我插梳子的时候,溶液都溢出来了,结果2小时后胶少了很多,孔就变小了,这是为什么啊?怎样避免或弥补?
vcve (2014-4-18 15:17:37)
浓缩胶一般不超过35min就会凝固,浓缩胶更快了,是不是AP或TEMED的量加少了?你一块胶的体系多大,加了多少?
applebook=213 (2014-4-18 15:17:56)
我配了11.8ml的浓缩胶,加了10ul的AP和2ul的TEMED,少吗?
applebook=213 (2014-4-18 15:18:17)
刚刚打错了,是配了1.8ml。
applebook=213 (2014-4-18 15:30:17)
那这种情况的话,这块胶还能用吗?
DONT (2014-4-18 15:31:35)
感觉你的量还可以,体系是参考什么?宝生物目录上的不错,TEMED是什么时候的,会不会变质了,建议再配配看,增加量,放置室温,AP 15ul,TEMED 3 ul试试看,
看看下边的帖子,可能对你有帮助:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5658570_1.html')
applebook=213 (2014-4-18 15:32:00)
DONT (2014-4-18 15:32:22)
几乎没有可能,氧化也不会这么快。我们从来都不脱气。
先检查一下体系,若没有问题,增加AP和TEMED的量(我还是觉得是不是TEMED不行了,要不借你同学的试试?),放置室温,试试看。
applebook=213 (2014-4-18 15:32:48)
TEMED应该没有问题的,配分离胶都挺好的,而且,是新的。
我增加了量了,流出在外面的都凝固了,不知道里面的凝了没有。
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