【求助】MALDI-TOF-MS检测蛋白质的话准确度

最新回复

• hcy517 (2016-3-19 10:04:08)

  能问一下，你做测试，溶液怎么配的，基质选的什么吗？

• 钻石 (2016-3-19 10:04:33)

  好像不同的样品基质不同吧，具体我也不太清楚。

• 小熊妮妮 (2016-3-19 10:04:54)

  看样品的纯度和分子量。样品越纯，含盐量越低，可区分200多的蛋白的分子量越高。
    不特殊处理的蛋白，使用普通的MALDI，可区分200多质量数的分子量在一千到两万之间。

• xiaoxiaoai (2016-3-19 10:05:30)

  我纯化出来的蛋白质做两次BC A 蛋白定量，一次稀释5倍，一次稀释10倍，结果分别是4.17mg/ml，1.4mg/ml，拟合系数均在0.99以上，为什么差距会这么大呢。这下面要检测蛋白活性，不知道按照哪个算，我用了cck-8法检测细胞活性，说明书上写着，要100ul 5000个细胞，我想了解下这个怎么估计呢，难道在铺96孔板之前要把细胞悬浮，计数，然后再铺板吗？还有蛋白质稀释好后能直接放在细胞房超净台里，还是放在冰上，要不要对蛋白进行灭菌处理等，谢谢

• daomei (2016-3-19 10:05:52)

  我也遇到bca稀释后浓度不准的情况。不过我最终是按照冻干品重量浓度算的。
  我是做mtt，需要对细胞进行悬浮计数，稀释到自己要的浓度。
  要做到蛋白无菌，就是0.22μm过滤，加药时在超净台内操作。我因为量很少，过滤会有损失，有时会把冻干品拿到超净台，拿灭过菌的无菌水溶解，再加药，这样不能保证完全无菌，不过比在外面溶了直接用来加药要强。
  你们实验室应该有人做过的，多问问呗。

• yazi (2016-3-19 10:06:14)

  嗯，好的，谢谢啊，请问下你在做mtt 之前，细胞培养要长满培养板，还是80%左右就可以了

• jishiben (2016-3-19 10:06:33)

  为了得到明显的结果，贴壁就加药了，大概是铺板后24小时

• aaby (2016-3-19 10:06:59)

  我养的是昆虫细胞，感觉2小时就贴壁了呢

• 8899 (2016-3-19 10:07:51)

  我想问下就是再铺96孔板前细胞要长成什么情况

• PP熊 (2016-3-19 10:08:12)

  我都是细胞传代时铺板。
  细胞状态稳定了加药呗，长太密了药物作用容易不明显。

• wawa11 (2016-3-19 10:08:33)

  嗯，是的，我发现了，我做了浓度梯度，可是梯度之间没有差异，只是处理组与对照组有差异，请问下你是用什么软件处理酶标仪读出的数据呢

• 8899 (2016-3-19 10:08:55)

  我测的时候也出现了稀释浓度后吸光度不准的现象，不知除了用冻干的蛋白算浓度，还用过什么方法解决这个问题？

• QQ爱 (2016-3-19 10:09:21)

  养细胞 细胞转染之后都可以活性检测，MTT检测