【求助】PCR条带弥散的问题

字体: 小中大 | 打印发表于: 2016-3-01 15:01 作者: 白白的来源: 分析测试百科网

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【求助】PCR条带弥散的问题

近来实验中，出现了很多次PCR条带弥散现象，不知各位战友以前有没有遇到过，用什么方法进行克服的，谢谢啊。

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最新回复

白白的 (2016-3-01 15:03:22)

先看看你模板的浓度是不是太高了，讲解的怎么样
如果没有特殊的就是你就没扩充来东西而已啦
哈哈
ququer787 (2016-3-01 15:04:50)

我之前也遇到这样的情况，一开始实验做的很好，但是后来就弥散了，而且是之前好的重新做也是弥散的，真的是搞不懂什么原因，什么方法都用了，比如说换新的试剂，换反应体系等，但是结果还是弥散，有没有什么好办法解决这个问题，大家快来帮帮忙！
ququer787 (2016-3-01 15:05:19)

优化Tm,降模板，降Mg
如果都优化过了，怀疑dNTP有问题
memory (2016-3-01 15:46:29)

模版有没有降解
ququer787 (2016-3-01 15:46:44)

应该不是试剂的原因，除了引物不一样，其他的引物还是能够扩增出来，而且也很好！
ns5fan (2016-3-01 15:47:16)

我做RACE也是出现这个情况，实在得不到单一的条带,真心求教啊
ns5fan (2016-3-01 15:47:37)

QUOTE:
原帖由 memory 于 2016-3-1 15:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

模版有没有降解
我是组织抽的RNA发现降解的很少才反转的，结果就老师弥散，用特异性引物好有单一条带呢
ns5fan (2016-3-01 15:49:14)

QUOTE:
原帖由 ququer787 于 2016-3-1 15:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
我之前也遇到这样的情况，一开始实验做的很好，但是后来就弥散了，而且是之前好的重新做也是弥散的，真的是搞不懂什么原因，什么方法都用了，比如说换新的试剂，换反应体系等，但是结果还是弥散，有没有什么好办法解决这个问题，大家快来 ...
我也遇到过，真心搞不懂啊