【求助】求qPCR高手指点下

最新回复

• vcve (2014-10-26 22:10:26)

  
  从图上看，这两个溶解峰都很单一，只是前边有一个小峰，应该是引物二聚体所致。不过，应该不影响结果，因为你跑的DN电泳是单带。
  如果你还想要好点的结果，可以降低引物浓度或提高退火温度试试。

• 宁小胡 (2014-10-26 22:10:47)

  QUOTE:

  原帖由 vcve 于 2014-10-26 22:10 发表
  
  从图上看，这两个溶解峰都很单一，只是前边有一个小峰，应该是引物二聚体所致。不过，应该不影响结果，因为你跑的DN电泳是单带。
  如果你还想要好点的结果，可以降低引物浓度或提高退火温度试试。 ...

  谢谢了。一直不敢用。正准备试试。

• leifengta (2014-10-26 22:11:20)

  这个小峰问题不大。如果降低引物浓度或者提高退火温度都不能消除引物二聚体的话，可以采用四步法定量，即在 72 ℃ 延伸之后再添加一个温度（该温度介于二聚体和目的条带溶解温度之间），在此温度下收集信号，只收集目的条带的信号而不收集二聚体的信号。

• dmg (2014-10-26 22:12:37)

  
  4楼方法较好，只需改动扩增程序即可，这种方法有相关的中文文献的。楼主可以自己看看，更明白原理操作。

• dmg (2014-10-26 22:12:57)

  QUOTE:

  原帖由 leifengta 于 2014-10-26 22:11 发表
  这个小峰问题不大。如果降低引物浓度或者提高退火温度都不能消除引物二聚体的话，可以采用四步法定量，即在 72 ℃ 延伸之后再添加一个温度（该温度介于二聚体和目的条带溶解温度之间），在此温度下收集信号，只收集目的条带的信 ...

  你好，你说的四步法 是否有相关文献支持？求教？谢谢