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烟酸的测定——溴化氰比色法（二）
关键词：食品安全检测 农药标准物质 无机标准样品 进口标准物质烟酸的测定——溴化氰比色法（二）
4.操作步骤
①样品的水解
a．动物性食品：称取含烟酸约100~400µg的样品于200 mL磨口锥形瓶中，加入40 mL氢氧化钙悬浊液1mol·L -1Ca(OH)2，在沸水浴中回流90 min，用玻璃棒搅拌使其完全水解。冷却后移入100 mL容量瓶内，以水稀释至刻度，过滤。
b．植物性样品：称取含烟酸约100~400µg的样品于200 mL磨口锥形瓶中，加入20 mL0．25 mol·L-1硫酸溶液，在沸水浴中水解1 h。水解后，用水冷却，移入100 mL容量瓶内，以水稀释至刻度，过滤或离心取上清液。
为了降低水解后溶液的色泽，有些样品也可以用硫酸一乙醇混合溶液(40 mL0．25mol·L -1硫酸+40 mL 95％乙醇)提取烟酸，于90℃水浴上回流4 h，然后定容至100 mL，过滤。
②中和：吸取25 mL滤液于50 mL容量瓶中，用溴麝香草酚蓝为指示剂，中和至微酸性(氢氧化钙水解液用2mol·L -1盐酸中和，硫酸水解液用6mol·L -1氢氧化钠中和)。
③脱色：在中和后的溶液中加入2 mL饱和硫酸锌溶液，加数滴戊醇作消泡剂，至氢氧化锌完全沉淀，加3mol·L -1氢氧化钠和1mol·L -1氢氧化钠，中和至pH值为6．5，然后加水至50 mL。放置10min后，离心分离。
④样品测定：于四支具塞试管中，分别加入脱色后的滤液各5 mL，一支样品管(记为A)，两支样品加标准液(其中一支加0．2 mL烟酸标准使用液，即2µg标准，记为B；另一支加0．5mL一烟酸标准使用液，即5µg标准，记为C)，最后一支为空白管(记为D)。在四支试管中各加入2 mL一溴化氰溶液，在60~70℃水浴中反应10~15 min，于冰水中冷却后，除空白管D外，其余三支试管各加lmL对氨基苯乙酮溶液，然后四支试管均加水至10 mL。
于冰水中冷却10～15 min，在波长420 nm处测定吸光度。A、B、C管的吸光度分别记为EA、EB、EC．
5．计算
X=[EA/(EB﹢EC﹢2EA)]×7×（K/V）×（100/m）
式中：X——烟酸含量，µg·(100 g) -1；
K——稀释倍数；
V——比色时取样体积，mL；
m——样品质量，g；
7——标准管加人烟酸(维生素B5)的量，µg。
6．说明
比色法简便、快捷，适合于烟酸含量较高的样品，如肉类、蘑菇、酵母等，烟酸含量低的不宜用此法。
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