【讨论帖】PCR扩不出来的原因是什么？

最新回复

• wiwi (2014-8-26 17:50:08)

  找不到合适的退火温度，延伸时间，退火时间等等

• bananapeople (2014-8-26 17:50:34)

  
  一般都是引物或条件问题

• bananapeople (2014-8-26 17:50:52)

  
  模板质量也挺重要的！

• leifengta (2014-8-26 17:51:15)

  很复杂的，很头疼，你的PCR不出问题其实是很幸运的

• DDD (2014-8-26 17:51:39)

  
  我觉得体系不会出太大的问题 一般的问题都是出在引物上

• 我是一片云 (2014-8-26 17:52:12)

  
  我觉得一不小心，哪里就都是问题了！

• jujuba (2014-8-26 17:52:47)

  
  引物对PCR来说还是很重要的

• XYZQ (2014-8-26 17:53:09)

  
  有时候不单单是一个因素的问题，是多因素的。

• dragonkilly (2014-8-26 17:53:50)

  很复杂，原因很多，但是引物一定要设计好～ 实验环境也有很大的影响～

• junhun (2014-8-26 17:54:18)

  体系不合适（酶，引物，镁离子浓度过高或过低等）

• niangao1980 (2014-8-26 17:54:50)

  引物设计很重要 熟练程度也是很关键的

• ENA (2014-8-26 17:55:16)

  可能是因为引物设计的不合适，或者是在PCR的时候温度选择上不合适，不过后者可以通过梯度PCR找到答案
  

• summerxx (2014-8-26 17:55:38)

  引物设计不合理或者设计失误,引物设计不好，一切都是徒劳！

• wood533 (2014-8-26 17:55:55)

  
  我觉得是模板质量的问题，其他的因素还是次要的

• youyou99 (2014-8-26 17:56:25)

  
  有时用25ul反应体系来扩20ul体系，最后条带特别好，你可以试试
  

• BUK (2014-8-26 17:56:44)

  
  退火温度挺重要的，不同的酶反应条件也会不同。

• any333 (2014-8-26 17:57:04)

  
  我有一次做了很长时间没扩出来，就是因为DNTP浓度太大，而抑制了PCR的进行

• utt0989 (2014-8-26 17:57:24)

  
  有时能P出，有时又P不出，不知什么原因。

• 04906 (2014-8-26 17:57:44)

  
  引物和反应体系

• junhun (2014-8-26 17:58:05)

  有回是模板GC含量高，加了DMSO就好了