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【求助】用sybr green好还是用TaqMan探针好?
我们想用定量PCR同时检测5种细菌,但不知道用sybr green好还是用TaqMan探针好?有的人说用sybr green好,有的人说用TaqMan探针好。用TaqMan探针特异性高,但同时检测5种细菌是不是很难?用sybr green能结合所有的模板,而且引物二聚体的问题可以解决。到底哪一种好?请各位高手指点,急阿!【求助】用sybr green好还是用TaqMan探针好?
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最新回复
45778 (2016-4-07 16:04:47)
你搞反了, 用sybr green是不能同时测多种样品的,而且sybr green也不能解决二聚体的问题,TaqMan倒是可以。你要是有足够经费,当然用TaqMan好。同时测5种是胃口太大了点,不过有公司正在开发。
66+77 (2016-4-07 16:05:01)
wanglaoshi (2016-4-07 16:05:15)
这要根据片段的长度来定啊,如果片段比较短,(最好在80-200bp)就用sybr green,如果比较长用taqman probe,当然,片段短做realtime更准确
xueyouzhang (2016-4-07 16:08:27)
无论是用sybr green
还是用taqman
都有难度的
现在临床上用双检都有一定的难度。
daod (2016-4-07 16:08:42)
其实同时检测几种细菌是可以的,国外可以同时检测18中细菌,如果你留意一下,在NCBI上应该可以搜索到那篇文章,采用的技术就是sybr green,利用Melting curve区分何种细菌,我觉得只有sybr green可以做到这一点,同时检测5种细菌,用Taqman 探针几乎是不可能的,难度太大,而且对仪器的要求也高,至少5通道才行。我当时想做,可惜老板不支持,做科研还是很有意思的。不过用荧光PCR检测细菌意义不大,主要还得摇菌。现有的方法也不差,不知你的目的毕业论文还是其他。
挖挖挖 (2016-4-07 16:25:30)
ytht88,谢谢你详细的回答。你说的那篇文章我没找到,你能帮我找一下吗?谢谢!
45778 (2016-4-07 16:25:45)
一般用用sybr就可以了,若不需要同时一起检测的话就分开做还清爽些,但每次只能标记一种检测物质。多重标记在引物设计上难度较大,尤其是相互之间的干扰。目前世面上的定量PCR仪最多也只能同时检测四种(bio-rad和abi的高端机型可以装五种不同的滤光片但同时只能检测四种)。
jude (2016-4-07 16:31:26)
TaqMan花费太高,而且5种探针设计难度大
9900 (2016-4-07 16:33:25)
xyw5 (2016-4-07 16:34:39)
mamamiya (2016-4-07 16:36:35)
如果经费许可,我建议你用TaqMan探针
DDD (2016-4-07 16:36:55)
用sybr green 好,TaqMan探针价格高.只要你引物设计好,在一块板上分五孔同时检测可以达到你的要求,不过一定要有内标,否则不能定量.如果有引物二聚体干扰,可通过提高读板温度来消除,一般引物二聚体的Tm值<80度.
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