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【求助】E.COLI发酵罐出现很奇怪的现象

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2016-3-08 15:19    作者: gemei0115    来源: 分析测试百科网

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【求助】E.COLI发酵罐出现很奇怪的现象
我的发酵是产生有机酸的，这几次的发酵很奇怪，种子一接进去之后，很快DO就从100%下降到30%，小于1小时（以前的发酵是至少需要3小时），之后DO时而升到50%以上时而维持在设定的30%左右（反复好几次）。加入IPTG之后，pH开始下降，碱泵开始启动，这个过程只维持了2小时左右，之后pH开始上升并超过设定的7.0，之后pH就不会再下降，直到发酵结束。之后是染过噬菌体，但现在并没有噬菌体出现。我已经转化过好几次菌种，每次都出现同样的问题。不知道是不是培养基的问题，因为我现在的种子是用的2XYT， 16g/l trptone, 10g/l yeast extract, 5 g/L NaCl，以前培养基用的是文献中的。
大家有什么好的建议，谢谢了！
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最新回复

  • toy (2016-3-08 15:19:54)

    我关注的是发酵pH上升
    你用的碱是氨水吗？
    有可能是发酵结束，氨挥发后溶入培养液内，造成pH值上升。我做保加利亚乳杆菌发酵时遇到过，但具体原因我也没探究明白

  • ladyhuahua (2016-3-08 15:20:11)

    怀疑是是宿主菌的问题。可以的话，能不能将你使用的宿主菌的基因型和载体信息发给我，具体分析一下。。。。。

  • youyou99 (2016-3-08 15:28:20)

    有可能你的菌种不纯，菌种之间产生了竞争抑制，我以前也出现了同样的问题，后来重新将菌种纯化才正常的。你的菌种可能在操作过程中污染了。

  • gemei0115 (2016-3-08 15:28:58)

    QUOTE:

    原帖由 youyou99 于 2016-3-8 15:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    有可能你的菌种不纯，菌种之间产生了竞争抑制，我以前也出现了同样的问题，后来重新将菌种纯化才正常的。你的菌种可能在操作过程中污染了。
    谢谢，我也有这种怀疑，准备把菌种重新纯化再试一试吧。另外，我还准备用别的菌再试一下。希望是染菌问题。

  • moonlight (2016-3-08 15:29:12)

    会不会是碳源不够？ 毕竟微生物首先保证自身生存的。尝试下用补碳源控制来拉低DO,也许会有效果

  • qqq111 (2016-3-08 15:29:58)

    菌种问题：菌种有氨基酸效应，即肉汤中的氨基酸消耗达到一定值后，菌种不能自身启动新的氮源代谢机制，由于饥饿，自身收缩，导致OD下降，接种后菌体生长越快，这种现象越明显，出现的几率也越多。

  • gemei0115 (2016-3-08 15:30:45)

    我关注的是发酵pH上升
    你用的碱是氨水吗？
    有可能是发酵结束，氨挥发后溶入培养液内，造成pH值上升。我做保加利亚乳杆菌发酵时遇到过，但具体原因我也没探究明白

    ==================

    我用的是10M NaOH

  • gemei0115 (2016-3-08 15:31:46)

    怀疑是是宿主菌的问题。可以的话，能不能将你使用的宿主菌的基因型和载体信息发给我，具体分析一下。。。。。

    =========================================

    我用的菌是BW25113，质粒是pZE载体。谢谢

  • vvmmoy (2016-3-08 15:35:20)

    如果是菌种中混有好气性的杂菌，会使DO在短时间内迅速下降。杂菌很严重时，会使DO很快下降至零，并且长时间不能回复。但是DO稳定在一定的水平反复，是什么原因呢?

  • vvmmoy (2016-3-08 15:36:48)

    QUOTE:

    原帖由 moonlight 于 2016-3-8 15:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    会不会是碳源不够？ 毕竟微生物首先保证自身生存的。尝试下用补碳源控制来拉低DO,也许会有效果
    碳源一直没有问题。我就是用DO来控制碳源的，但是在初糖是20g/L，应该足够了。

  • u234 (2016-3-08 15:37:12)

    1、代谢途径是什么？从这方面考虑
    2、发酵过程中有没有反馈抑制现象？
    3、对于感染噬菌体，是否采取杀菌消毒措施？包括设备和环境。

  • DDD (2016-3-08 15:37:31)

    有几个问题想请教楼主：
    1.从种子到发酵是怎么接的菌啊？有二级种子么？你说一小时DO就降下来了，图中19h还300转呢，是养了10几个小时的二级种子么？
    2.是在哪个时间点加入的IPTG，浓度是多少，此时菌体OD多少？
    3.你说的是“转化”过好几次菌体，是提质粒重新转化？还是分纯？如果是重新转化而不是分纯的话，会不会是感受态的来源菌有问题？
    4.发酵培养基是什么？（如果可以说的话）

  • shenkunjie (2016-3-08 15:37:47)

    应该是宿主菌的问题了。

  • october7 (2016-3-08 15:38:03)

    首先确定你的电极有问题不？是否进行校正？都没有问题那就是你的种子液接的太多了。前期生长消耗碳源是会产生酸的，所以pH会下降，后期碳源不足，菌体会产生含氮类的碱性物质，加上菌体自溶，pH会增加，建议在菌体达到一定浓度的时候就收了吧，要想高密度你的培养基不适合，可以在培养基中加入缓冲液。谢谢！

  • qqq111 (2016-3-08 15:38:39)

    楼主，这个是什么发酵罐出来的数据？感觉比好些公司的详细，图片曲线清楚。
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