【求助】镁离子和Taq聚合酶到底啥关系?

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镁离子少了,酶活性降低,
镁离子多了,就有非特异性扩增,也有说镁离子多了会不扩增的。
到底镁离子是怎么影响Taq聚合酶的呢?

期望有大大能比较详细的解释下~
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最新回复

  • ladyhuahua (2014-9-25 14:54:16)

    Mg2+是酶的一种辅助因子,没有它,酶的活性发挥不出来;两者必须在适当的比例下,才能发挥出良好的功效;
  • feima+ (2014-9-25 14:54:39)

    TaqDNA聚合酶是Mg2+依赖性酶,该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感。以活性程度很低的鲑鱼精子DNA为模板,dNTP的浓度为0.7~0.8mmol/L时,用不同浓度Mg2+进行PCR反应10min,测定结果为Mgcl2浓度在2.0mmol/L时该酶催化活性最高,此浓度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性,Mg2+过高就抑制酶活性,当Mgcl2浓度在10mmol/L时可抑制40~50%的酶活性。由于Mg2+能与dNTP结合而影响PCR反应液中游离的Mg2+浓度,因而Mgcl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整,优化浓度。一般反应中Mg2+浓度至少应比dNTP总浓度高0.5~1.0mmol/L。适当浓度的KCl能使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50~60%,其最适浓度为50mmol/L,高于75mmol/L时明显抑制该酶的活性。
    参考资料:cuturl('http://www.51protocol.com/PCR/base/20061106/156.html')
    至于Mg2+影响Taq酶活性的分子机理,就不太清楚了,而且好像也没必要知道的这么详细,呵\(^o^)/~
  • nn255 (2014-9-25 14:55:03)


    生化书上写的是  镁离子与ATP的前两个P 作用形成键 是最后一个P容易释放 ,所以Mg+的作用是辅助ATP的利用~  书上写的  不知道对不对~
  • dodoit (2014-9-25 14:55:32)


    难道就是说,镁离子作用的并不是酶,而是所有和NTP有关的反应么??
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