【求助】为什么我PCR后琼脂糖电泳的条带都是往上托带？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-3-11 16:29 作者: woshi 来源: 分析测试百科网

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【求助】为什么我PCR后琼脂糖电泳的条带都是往上托带？

大家好，我最近跑电泳老是跑成一整条涂布带，会托的长长的，我的目标条带不明显或者说没有，这是怎么回事啊？摸索了很久了，没找到原因，很痛苦。

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最新回复

toy (2015-3-11 16:29:38)

1.跑胶的电压太大~！
2.样品有些降解！
3.配的胶不均匀！
看看这三个原因。
greenbee (2015-3-11 16:29:52)

退火温度和引物特异性是关键
bangqi_k (2015-3-11 16:30:09)

你的模板有没有问题？还有就是引物的特异性
sistis (2015-3-11 16:30:24)

拖带原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。
其对策有：①减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量⑤减少循环次数。
试试看，等待你的好消息
bamboo16 (2015-3-11 16:30:40)

这是没有P出来东西吗！退火温度很关键！
woshi (2015-3-11 16:31:06)

QUOTE:
原帖由 sistis 于 2015-3-11 16:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
拖带原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。
其对策有：①减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量⑤减少循环次数。 ...
您好，我做的是不对称PCR,我的模板本身就是82bp的寡居核苷酸。以前做的很顺利，从某一天开始就再也做不出来了。
woshi (2015-3-11 16:31:22)

QUOTE:
原帖由 bamboo16 于 2015-3-11 16:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
这是没有P出来东西吗！退火温度很关键！
恩没有我的目标条带
woshi (2015-3-11 16:31:50)

QUOTE:
原帖由 toy 于 2015-3-11 16:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
1.跑胶的电压太大~！
2.样品有些降解！
3.配的胶不均匀！
看看这三个原因。
这3点，我倒觉得没问题。
阿凡提 (2015-3-11 16:32:19)

应该跑不出来了，你重新做吧
wood533 (2015-3-11 16:32:40)

我前几天也遇到了这种情况，是酶的问题，换了酶就好了
TNT (2015-3-11 16:32:55)

楼主，您的问题解决了吗？我也遇到同样的问题了！太痛苦了！试验做了好久了，换了好多条件都是这样的抹带！长长的抹带！请楼主指点一下迷津啊！