【求助】图不清楚，请教高手给分析一下原因

最新回复

• youyou99 (2015-4-03 09:32:18)

  优化下PCR反应体系，退火温度是不是低了点/

• JK.jon (2015-4-03 09:34:04)

  
  既没有给出实验条件，也不说明遇到什么问题，这样的提问太不负责任
  

• bgf5 (2015-4-03 09:34:25)

  退火温度是56,39个循环的，

• hyuu (2015-4-03 09:34:37)

  退火温度低，引物特异性不好，镁离子浓度高，都可能，我遇到过这种情况，把条件摸索一下就行了

• cj_mondy (2015-4-03 09:34:53)

  把退火温度提高2℃试试，也可以 做个梯度

• whitesheep (2015-4-03 09:35:09)

  
  （1）引物特异性不好
  （2）退火温度太低，推荐做个降落PCR
  （3）模板用量太大，如果是人基因组的话你扩这么小的片段用个50~100ng足够了
  （4）感觉你的胶好像跑的也有些问题

• ns5fan (2015-4-03 09:35:27)

  
  目的条带，正对照，图上啥都木有

• 乐哥 (2015-4-03 09:35:53)

  
  可以做个touch down！另外，你的酶是不是加多了？实在不行的话整个热启动！

• veiwu (2015-4-03 09:36:15)

  拖带太多，引物特异性不好，感觉你的退火温度也有点低，多摸索一下条件就行啦

• kswl870 (2015-4-03 09:36:36)

  
  我也遇到了这个问题，可能是引物的问题

• remenb (2015-4-03 09:36:57)

  买个好设备 拍的太不好了

• gmt (2015-4-03 09:37:16)

  
  个人经验，以前也做过PCR：
  1 提高退火温度，可在56-65度设梯度尝试；
  2 换用GC buffer（值得推荐）
  3 换用高保真DNA聚合酶，Pfu酶，不过这个酶比较贵

• qhyu (2015-4-03 09:37:37)

  没有目的条带大小，不好分析，建议拍照的时候明暗度要调好，另外可以适当的调下镜头的焦距，放大图片再拍