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【求助】病毒灭活/去除的灭活流程
本人主要做的单克隆抗体纯化这方面的工作,进展还没到病毒灭活/去除验证这一步,但现在想提前了解病毒灭活/去除验证方面的问题,之前我也找人咨询过,不过依然还是有些疑问。我现在已做出抗体在稳定范围(比如pH可以降到3,灭活时间可以3小时),因为之前咨询过其它人,他们说给中检所验证是提供具体的参数(比如pH3.3,灭活1h),然后他们验证,如果验证不过,需要重新弄灭活工艺,然后重新中检所排队。所以我的疑问就是如果给定的参数验证不过关,重新来弄的话,花的时间是比较长的。我的想法是能不能根据我的稳定性范围能不能多提供几组参数(比如pH3.3,灭活1h; ph3.3灭活1.5h),如果验证一组过关,就不需要验证下一组(我个人想法,可能比较幼稚)。不过有没有做过的大侠解答下,具体是怎么操作的,不胜感激!【求助】病毒灭活/去除的灭活流程
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最新回复
remenb (2015-8-07 16:48:36)
低pH灭活完全不用担心,0.5hr基本就可以了。
你该担心的是膜过滤。
我是新人 (2015-8-07 16:49:38)
remenb (2015-8-07 16:51:08)
QUOTE:
首先你需要了解验证的过程,知道人家是怎么操作的,然后你才能设计好你的实验方案。我们不可能一次就选择最好的方式,你需要做的是先了解、沟通,然后再去做。验证不过关是什么概念?其实验证过程是随时可以取样的,你觉得哪几个点比较重要,然后就去检测,哪个过了就是哪个。(这个范围不用我提供了吧)
我是新人 (2015-8-07 16:51:31)
QUOTE:
我总结下对你回复的理解,不知道正不正确?通过与中检所沟通,设计好实验方案,此方案包含可能性比较大的灭活方案(比如pH3.4灭活,然后不同时间点取样;pH3.3 灭活,然后不同时间取样检测,然后哪个行就用哪个参数)。然后膜过滤也基本是这样设计思想。我为什么提这个问题呢,我之前的理解与你说的是一样的,之后我的领导跟我说,灭活/去除工艺验证只能给中检所提供具体的参数(比如ph3.3,1h),不能在中检所验证过程中一个一个参数去试,当时为此争论了好久,因为我也没做过,我也不确定。所以在此提出此疑问,不知道我的理解对不对?remenb (2015-8-07 16:51:55)
QUOTE:
如果你想做多个参数,当然也是可以的。一个实验作为一个验证收费。对于企业来说是不划算的。同样,中检院不会为了你一个项目做这么长时间的。
kulee (2015-8-07 16:52:12)
可以先外包给CRO做下。用中检所认可的指示病毒,确定两个抗体能保持稳定的低pH值以及不同的处理时间长度,根据《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》能去除4个log就行。
我是新人 (2015-8-07 16:52:40)
可以先外包给CRO做下。用中检所认可的指示病毒,确定两个抗体能保持稳定的低pH值以及不同的处理时间长度,根据《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》能去除4个log就行。
DCS (2015-8-07 16:52:58)
低pH有效灭活病毒参数范围:pH3.3-pH3.7,室温孵育1-2h。(pH越低时间越长,病毒滴度下降log数越大,4log即为有效)。
根据产品的耐受情况确定pH,推荐pH3.5,1h。
vvmmoy (2015-8-07 16:53:19)
我知道国外找BioReliance做的比较多,经常能在国际大会上看到他们的报告。
qqq111 (2015-8-07 16:53:35)
请参考《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》
yueban-1147 (2015-8-07 16:53:51)
其实,国内已经有个公司做病毒去除验证了,我们就是找他们做的,中检院排队实在是太长了,我想药审中心应该会对第三方验证认可的。公司沟通起来比中检院好多了
我是新人 (2015-8-07 16:54:14)
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老兄找的那个公司叫啥名字呢,药审中心认可了吗?刘白白 (2015-8-07 16:54:37)
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是在苏州的么?txwuyan (2015-8-07 16:54:56)
药明康德有专门做除病毒验证的服务,有兴趣可以去找他们
yueban-1147 (2015-8-07 16:56:08)
QUOTE:
恩啊,就是楼上说的药明康德,在苏州西山建了一个检测中心,价格比中检院稍高,但是不用排队,还是很值得的。yueban-1147 (2015-8-07 16:57:41)
QUOTE:
新建的,虽然做了几个项目,但是应该还没有报到国家局。据他们讲药审中心的是认可的,估计之前也是做过一些私下的沟通吧。DCS (2015-8-07 16:57:57)
我们做过两个项目的验证,已经申报。pH3.5+-0.1,20-25℃,2h孵育灭活。中间过程取样。这个条件基本上没有问题
阿k (2015-8-07 16:58:55)
低pH值病毒灭活时间取决于你样品在该pH值下的稳定性及病毒下降的log数,只要你病毒下降log数达到相关要求,当然是时间越短越好!另外,现在国家局对生物制品的要求是要有两步不同原理的病毒灭活/去除工艺!
xue258 (2015-8-07 16:59:12)
严格地说,低pH对脂包膜病毒较有效,对非脂包膜不很肯定,灭活效果也与pH值、温度、时间、蛋白浓度密切相关。
xue258 (2015-8-07 17:00:12)
例如低pH对常用标志病毒PPV灭活效果就常不太理想。有时对单抗而言,常选用膜过滤去非脂包膜病毒
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