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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2016-4-11 22:18 作者: 66小飞侠 来源: 分析测试百科网
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原帖由 66小飞侠 于 2016-4-11 22:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '') 多谢多谢,真是很复杂。这些多肽是(12肽)是根据筛选噬菌体肽库获得的表位合成的,所以不知其酸碱性,多肽从DNASTAR等软件能预测吗?
原帖由 8s5g 于 2016-4-11 22:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '') 我在公司就是做多肽KLH耦联的,其实耦联好的多肽溶解不掉是很正常的, 你用双蒸水溶解后的液体直接免疫动物,其实效价会很好的, 因为机体对固体颗粒的免疫效果比液体的更好。相反,你用DMSO溶解的时候,会破坏KLH的空间构象, 相 ...
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jingling845 (2016-4-11 22:18:54)
1 溶解性是使用多肽时比较重要的问题。每个氨基酸都有其固有化学特性。如亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、颉氨酸Val是疏水性的,其他氨基酸如赖氨酸Lys、组氨酸His、精氨酸Arg是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性 。
(备注:在多肽溶解之前,建议您先用少量肽来试验最适溶解方法,只有当多肽完全溶解后,才能加入水或缓冲液将之稀释至最终浓度)
2. 一般情况下,多肽首先选择溶解在灭菌的蒸馏水或去离子水中 。如果这个肽是不溶于水的,且其是酸性的,加入温和的碱如0.1%的NH4OH能够增加肽的溶解度。相反,对于碱性的肽,温和的酸如0.1%的醋酸或TFA(三氟乙酸)能够帮助多肽溶解。
3. 在一些情况下,某些肽具有很高的疏水性时,不易溶解,可以用少量的DMF或DMSO帮助其溶解 ,这时推荐将多肽溶解于高浓度,然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度。因为盐会导致疏水性多肽的聚合,所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液进一步稀释 。当您遇到这种情况时,请您注意以下几点说明:
(1)DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解,这是通过破坏多肽的二级结构而助溶。
(2)这种试剂的使用可能会对其生物活性及后续的研究工作造成干扰,请您在溶解考虑到这个问题 。
(3)虽然DMSO有毒,但是适量浓度应该对实验结果影响不大,但最好预实验证实一下合适的溶解浓度,而且必须设置相应的溶剂对照组
4.对于一些在弱酸、弱碱及有机溶剂中均不能很好溶解的多肽,您可以尝试超声波处理 ,超声有助于打碎颗粒增加肽在水中的溶解度。但在使用超声处理请注意: 超声会引起溶液发热从而造成多肽降解,所以您必须在冰上操作!
jingling845 (2016-4-11 22:19:23)
1 溶解性是使用多肽时比较重要的问题。每个氨基酸都有其固有化学特性。如亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、颉氨酸Val是疏水性的,其他氨基酸如赖氨酸Lys、组氨酸His、精氨酸Arg是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性 。
(备注:在多肽溶解之前,建议您先用少量肽来试验最适溶解方法,只有当多肽完全溶解后,才能加入水或缓冲液将之稀释至最终浓度)
2. 一般情况下,多肽首先选择溶解在灭菌的蒸馏水或去离子水中 。如果这个肽是不溶于水的,且其是酸性的,加入温和的碱如0.1%的NH4OH能够增加肽的溶解度。相反,对于碱性的肽,温和的酸如0.1%的醋酸或TFA(三氟乙酸)能够帮助多肽溶解。
3. 在一些情况下,某些肽具有很高的疏水性时,不易溶解,可以用少量的DMF或DMSO帮助其溶解 ,这时推荐将多肽溶解于高浓度,然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度。因为盐会导致疏水性多肽的聚合,所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液进一步稀释 。当您遇到这种情况时,请您注意以下几点说明:
(1)DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解,这是通过破坏多肽的二级结构而助溶。
(2)这种试剂的使用可能会对其生物活性及后续的研究工作造成干扰,请您在溶解考虑到这个问题 。
(3)虽然DMSO有毒,但是适量浓度应该对实验结果影响不大,但最好预实验证实一下合适的溶解浓度,而且必须设置相应的溶剂对照组
4.对于一些在弱酸、弱碱及有机溶剂中均不能很好溶解的多肽,您可以尝试超声波处理 ,超声有助于打碎颗粒增加肽在水中的溶解度。但在使用超声处理请注意: 超声会引起溶液发热从而造成多肽降解,所以您必须在冰上操作!
66小飞侠 (2016-4-11 22:19:42)
jingling845 (2016-4-11 22:21:11)
QUOTE:
可在线预测,详见cuturl('http://www.expasy.org/tools/')
66小飞侠 (2016-4-11 22:21:37)
我预测了一下,大部分的肽是酸性的,用PBS或者PBS+超声可以溶解(不过还是呈现细小混悬状态,勉强可以分装)。用水基本都不溶解。现在就是不知道DMSO对免疫动物是否有影响(因为有的样本先用DMSO也没有完全溶解)?
11_hjx (2016-4-11 22:21:52)
低浓度的DMSO是不会又毒性的,但是如小舟子说的,最好设立对照组比较观察。同时也要看你的多肽是做什么试验的,如果还需要进行载体的偶联,就不用太担心DMSO的影响 。
shanzhapia696 (2016-4-11 22:22:10)
66小飞侠 (2016-4-11 22:22:48)
8s5g (2016-4-11 22:23:11)
我在公司就是做多肽KLH耦联的,其实耦联好的多肽溶解不掉是很正常的, 你用双蒸水溶解后的液体直接免疫动物,其实效价会很好的, 因为机体对固体颗粒的免疫效果比液体的更好。相反,你用DMSO溶解的时候,会破坏KLH的空间构象, 相反会降低它的免疫原性!
summerxx (2016-4-11 22:23:29)
QUOTE:
请问那个公司?8s5g (2016-4-11 22:23:47)
11_hjx (2016-4-11 22:24:14)
第二,即使溶解得不是很完全关系也不大,可能效果更好;
第三,DMSO没有影响;
第四,预测跟实际使用情况会有很大不同,意义不大。
xuuuu (2016-4-11 22:24:33)
每个氨基酸虽说都有氨基和羧基
但是其支链上海有其它基团
101010 (2016-4-11 22:24:51)
至少,DMSO对炎症反应(主要是白细胞的迁移过程)是有显著抑制作用的,尽管文献都这么使用DMSO来溶解某些试剂。按照文献使用的剂量和腹腔注射途径,我做了许多对照,才得出这个结论的。所以,一定要谨慎。
gmjghh (2016-4-11 22:25:16)
每个氨基酸虽说都有氨基和羧基
但是其支链上海有其它基团
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实际意义不大,这跟成盐性质、冻干的物理性质等等相关。
WHO? (2016-4-11 22:25:42)
学习了,但我有个问题,想请教下各位高手,用什么免疫方法,效价比较高呢?
toy (2016-4-11 22:26:03)
下列方法有助于您选择合适的溶剂:
(1)判定多肽的电荷特定,设定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1;碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它氨基酸的电荷为0。计算出将电荷数。
(2)如果净电荷数 >0,多肽为碱性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果多肽还不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(3)如果净电荷数<0,多肽为酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(4)如果净电荷数=0,多肽为中性,一般需要用有机溶剂如乙腈,甲醇或异丙醇,DMSO等溶解。还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的多肽。
【求助】合成多肽免疫动物,多肽难溶,欲加DMSO等溶解...