第25期质谱沙龙上关于双梯度液相的报道
戴安公司双梯度液相色谱及其应用
戴安公司液相色谱应用工程师赵秀苔 老师
戴安公司的液相色谱应用工程师赵秀苔老师向大家介绍了“戴安公司双梯度液相色谱及其应用”。赵老师介绍，戴安公司拥有从纳升级液相色谱、常规液相色谱到半制备级液相色谱全面的高效液相色谱级别。此外，戴安公司还生产常规、超高效、生化液相色谱柱。智能化的液相色谱有变色龙色谱网络软件支持，可控制大约30 个生产厂家的近300 种的色谱部件。
戴安公司的UltiMate3000系列液相色谱有紧凑系统、标准系统、钛系统、超高速液相色谱(RSLC)、x2双梯度液相色谱系统(DGLC)。其中，赵老师主要介绍了DGLC。DGLC的模块及其功能如下图所示。
DGLC模块及功能
DGLC有不同的配置可供用户选择，如微流速系统DGP3600M和超高效(U-HPLC)双梯度液相色谱系统DGP3600RS等。DGLC可以为用户解决以下问题：
1) 快速分析：即在不改变已经经过认证的方法的前提下，提高分析速度。包括节省梯度平衡的冲洗时间、提高梯度方法的速度的串联(Tandem)色谱以及对任何方法都能通过共享色谱泵、自动进样器和柱温箱来提高一倍分析速度的并联(Parallel)色谱。
2) 不同应用之间的快速切换：一台仪器同时为两种应用做准备，连续不间断运行两个不同应用。
3) 多维分离：即通过2D 或3D 提高分离度，多用于生化及蛋白质组学领域，目前主要集中在微柱、毛细管柱及纳升柱，也包括今年流行的“全自动离线”多维色谱。
4) 样品的在线(On-Line)前处理：集成的SPE 小柱可提高自动化程度，还可以直接分析血样、食品样等较脏的样品。
5) 提高质谱灵敏度：体现在在线快速脱盐、使用左泵作为辅助泵以及通过柱后交换流动相增加挥发性有机溶剂比例、调节pH值、或添加辅助试剂以提高质谱的响应值。
6) 柱后衍生;将第二个泵作为柱后衍生泵。
7) 兼容性：可兼容任何现有的HPLC 系统。
接下来，赵老师戴安公司的几种智能化质谱解决方案：
1. 串联液相色谱
串联液相有两个流路，色谱柱在两个流路间切换，即再平衡过程中直接用柱切换阀切换至图中左面的泵进行再平衡和清洗，在运行周期中省去了冲洗及平衡色谱柱的时间。
2. 并联液相色谱
并联液相相当于两套独立的流路，共享一个自动进样器和柱温箱。并联液相通过变色龙软件将其配置为两套系统，可运行不同应用程序下的两套样品。
为了进一步说明上述解决方案的特点，赵老师举了环境中爆炸物残留的分析的应用实例。
爆炸残留物的分析在军事演习现场及周围环境评价、犯罪及恐怖袭击案件的侦破中都有重要的意义。EPAMethod8330是检测环境中爆炸残留物最常用的方法，该方法中规定了14种需要监测的爆炸物，建议用一种色谱柱(如：C18柱)作为主要的分析柱分离这些化合物;并建议用另外一种选择性有差异的反相柱作为补充确认(如：CN柱)。14种化合物都要被分离(而2006年新的8330B需要分析多达17种)，并在分析后尽可能快地确认。用普通C18及CN很难满足上述要求。Dionex的专用色谱柱(Acclaim Explosive E1 及E2 色谱柱)可以一次分离全部14 个所要求的物质。E1 及E2 有不同的选择性。如果用并联液相色谱系统，可用E1 分析、E2 确认，大大提高了检测通量。
3. 两维色谱(2D色谱)
2D色谱结合使用两种不同选择性的色谱柱，极大程度地提高了峰容量和分离选择性。2D色谱有在线(on-line)和离线(off-line)两种。
off-line 2D色谱是一种可以极大提高复杂混合物分离度的简单、快速的方式。此方法最具优势的地方是一维和二维之有浓缩富集的应用。此方法不适合定量分析，但是，如果样品的热稳定性好，提高自动进样器温度使流动相挥干再定容就可以克服这一点。用变色龙软件可编辑自动进样器程序。
on-line 2D色谱适宜应用于简单体系，它提供一个快速、方便的常规不纯物的分析。密闭体系，避免样品丢失以及降解，可用于定量分析。
4. 在线固相萃取/ 浓缩(On-Line SPE)技术
On-Line SPE技术具有以下特点：减低手工操作需求、节约时间;重现性高;方便于直接进样;更快、更经济;可以自动化;无人照管操作过夜或过周末;减少接触对人体有害物质的机会。该技术广泛应用于食品及饮料分析实验室、环保实验室和制药及临床实验室。On-Line SPE检测方法可借助变色龙软件进行开发。
如图所示，SPE小柱从基质中分离样品，转移到分析柱上后，被分析物被分离、检测。该方法可以直接检测体液、地表水等复杂样品，比其他技术更快、更精确、更便宜且自动化水平更高。
赵老师列举了加标抗真菌剂样品、环境水样品中多环芳烃(PAH)的分析、环境水样品中多酚的分析环境水样中邻苯二甲酸酯的分析、水样中痕量微囊藻毒素等实例，进一步阐明了On-Line SPE的应用。
报告最后，赵老师通过达能脉动饮料中痕量VB12的测定这一实例更加具体地介绍了戴安公司液相系统。
除食品行业外，戴安公司的液相系统还可应用于药物代谢领域中血、尿中药物的分析及样品在线纯化(例如D、L构型纯化等)。
报告下载：戴安公司双梯度液相色谱及其应用
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