【求助】转基因小鼠基因PCR鉴定，琼脂糖凝胶电泳没有条带

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-10-26 22:48 作者: qumm1985 来源: 分析测试百科网

老鼠是jackson买的，引物序列，反应程序都是上面给的，以前能P出来的，条带大概是700，
但是现在的条带都是弥散在孔中的，我试过很多种裂解方法，蛋白酶k，AB液的都无效，引物也换了很多公司，mix也是，都是没有条带，各位高手能不能给点建议，谢谢大家了，小弟pcr菜鸟，求救！

rxcc33 (2014-10-26 22:49:14)

回忆下以前是怎么p出来的，调整下温度程序，换换pcr仪试试，各个步骤都排查一下。
dreaming (2014-10-26 22:49:37)

这个情况我也遇到过，你可以换一种MIX试一下！有的MIX 不好，跑不出来条带的！
dreaming (2014-10-26 22:50:09)

还有就是，凝胶的浓度考虑一下！
ha111 (2014-10-26 22:50:26)

可以提高下退火温度试试～
wood533 (2014-10-26 22:50:54)

你的模板浓度会不会太高呢？模板浓度高了也会抑制PCR反应的。你稀释下模板试一试。
wood533 (2014-10-26 22:51:13)

我赶脚是模板浓度高了，如果你再P不出来，可以联系我～～
qumm1985 (2014-10-26 22:51:31)

QUOTE:
原帖由 dreaming 于 2014-10-26 22:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

还有就是，凝胶的浓度考虑一下！
胶本来是用2%的，后来试过1.5%
qumm1985 (2014-10-26 22:51:53)

QUOTE:
原帖由 wood533 于 2014-10-26 22:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

你的模板浓度会不会太高呢？模板浓度高了也会抑制PCR反应的。你稀释下模板试一试。
一开始是6ul后来加过0.5ul的。都没出来过。
ffooll (2014-10-26 22:52:16)

减少dntp的用量
ns5fan (2014-10-26 22:52:41)

很可能是模板浓度过高，如果减少模板不行，那就稀释模板，稀释3-10倍试试。