【求助】细菌计数最简单有效的方法是什么

最新回复

• 冰激凌 (2015-6-25 15:02:15)

  要是方便的话，感觉平板计数较好些，应为计数器来没那么多麻烦，要是条件允许的话，其他方法也可以！

• aaby (2015-6-25 15:02:47)

  湖水样品，最好是DAPI 和 FC。 平板太不靠谱，很多unculturable的

• efp (2015-6-25 15:03:16)

  我用了dapi在400倍下计数，细菌是不是特别小，一个小点？

• zouyou (2015-6-25 15:03:47)

  40倍吧， 40倍下 差不多 就是一粒沙那么大那么大

• efp (2015-6-25 15:04:21)

  物镜40倍， 目镜10倍。嗯，我计数的是沙粒大小的。，谢了啊

• PP熊 (2015-6-25 15:04:52)

  看了个文献说显微镜计数比较好。流式细胞仪也不错，其他方法不推荐。

• 美人鱼 (2015-6-25 15:05:28)

  嗯 谢谢。。。但是 细胞和细菌一起，怎么计数好呢？好纠结。。。

• 冰激凌 (2015-6-25 15:06:17)

  你有DAPI具体的方法吗？能给我一下吗？

• p1900 (2015-6-25 15:06:54)

  细菌显微镜计数方法
  1、        取1 ml样品，超声40 s，低功率，0.2 cycle/second。
  2、        加200 微升，100 微克/ml DAPI，暗处染色5 min。
  3、        用0.22 微米，黑色聚碳酸酯膜过滤收集，然后用无菌水冲洗两次。
  4、        加一滴荧光显微镜油于载玻片上，贴上载菌体的滤膜，再向滤膜加一滴油，盖上盖玻片（滤膜两面均不能有气泡）。
  5、        在荧光显微镜365 nm处观察，DNA为亮蓝色，非DNA为黄色。
  6、        数10个视野，每个视野约20个。
  N=X*Na*S/(St*V)
  N：样品含菌数，个/ml
  Na：各视野平均菌数，个
  X：样品稀释倍数
  S：滤膜滤水面积，cm2
  St：视野面积，cm2
  V：过滤样品量，ml

• dadaai (2015-6-25 15:07:47)

  如何快速判断显微镜视野面积并统计其中细胞
  来源:责任编辑：yiyi        时间:2011-7-4 10:39:28
  如何快速判断显微镜视野面积并统计其中细胞
  方法一：
  根据文献的参考标准计数，一般是高倍镜下（x400）或（x200）随机选取几个视野，计数一定量的细胞，争取做到能反映切片的全貌；也有专门的计数软件，需要先选取视野摄像，然后通过软件处理。
  视野面积==显微镜目镜的视场数 / 物镜的放大倍数，
  例如OLYMPUS的目镜的视场数为22，那么10X物镜下的视野面积为直径为
  2.2mm。
  而20X的视野面积为1.1mm
  关于免疫组化表达阳性的细胞，现在多数使用IPP软件进行实现
  方法二：你可以使用网格计数，利用体视学方法进行计数细胞的面积，根据阳性细胞数所占的网格数目多少，一个网格的面积大小根据不同的网格来判定，这样你就可以初步得出阳性细胞数的面积大小，具体方法你可以在维谱网上搜索“网格计数”就可以了。
  方法三：是本人一些小经验
  一个相对简单的方法：
  1、用一个显微镜下的标尺（也可以用一个检验科人工计算细胞的计数板），拍照，然后根据标尺的大小，计算出一个视野的面积（可以放大后打印出来，然后计算一张照片的大小，应该说用一般的尺子加上简单的数学计算就可以得出来）；
  2、然后同等条件（放大倍数相同即可）下用数码相机照像，电脑上数阳性细胞的个数，除以面积即可得出结果。
  当然，如果有图像分析软件，第一步用电脑完成就更为准确和简单了。
  相关资讯：相差显微镜在细胞培养中的应用

• 冰激凌 (2015-6-25 15:08:21)

  样品要怎么处理啊？直接用采的水吗？我的水样有其他的藻类会干扰吗？

• 大花猫bb (2015-6-25 15:08:54)

  平板计数是最有效的方法，操作简单，就是会花点时间。其他两种方法会存在很大的误差，而且要求比较高

• zouyou (2015-6-25 15:09:29)

  藻类有多大？大的没关系吧，超微型我不太清楚.不知道有没有人做过类似的验证实验