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【求助】请大家帮忙看看扩增曲线(附图)谢谢!
很不好意思在这里问些白痴问题,只因为我的毕业实验要用real-time PCR 来检测,但由于种种原因我是送出去给公司做的,【求助】请大家帮忙看看扩增曲线(附图)谢谢!
我想请问大家:real-time PCR 的
1、最后结果要不要跑胶?
2、做的扩增曲线没有明显的指数增长期、线性增长期、平台期,而且不够平滑,帮忙看看扩增曲线能否通过评审?
公司作如下解释,不知是否合理?
“扩增的是40循环,而不是永无止境扩增下去,所以看不到平台期。做的实时量PCR(FQ-PCR)是终前检测,不是终后检测,所以也不需都要达到平台期。如果从审美观点上可能不是很好看,但这不会影响结果。使用是染料法做,曲线最后面肯定有个折线,因为这是机器正在采溶解曲线,这也是做染料必须有的曲线。"
谢谢大家!
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最新回复
october7 (2016-2-29 16:27:43)
i think de guy in de company s right nd de outcome is totally fine, to me .
as to gel eletrophoresis, sure, u cn do it if u `d like but not necessary ,in that there s nothing indicating u got non-specific amplication in ur products . plus, de graphs already showed amplication happend.
all above is jst my thought, u may need much more opinions frm others.
HOT兔 (2016-2-29 16:28:02)
我觉得溶解曲线还行,但不明白后面的折线,我也是新手,但我自己做的,没遇到过这种情况。只是看不出内参和目标之间明显的扩增差别。
cocacola (2016-2-29 16:28:39)
realtime PCR的核心数据就是扩增曲线,它不仅反映了CT值,更重要的是反映了整个PCR的扩增质量,而ct值必须依据一个良好的扩增质量才能作为ct值来确定,所以,如果你的扩增曲线不好的话,即使得到了ct值,这个值也是不可靠的,在科学研究上,不可靠的数据是不能作为实验结果来达到你的实验目的。
cocacola (2016-2-29 16:29:26)
QUOTE:
这可不是好现象。amplication 还弄个错误的单词忽悠大家说英语没有错,要选择适当的环境
taoshengyijiu (2016-2-29 16:29:43)
1.因为染料法最后做融解曲线,所以理论上不用跑胶,从融解曲线上就可以分辨特异性了(从你的融解曲线上看,只有3~4条存在非特异性扩增);
2.似乎只有HGF的平台期不明显,其他都还可以。不明显的原因一是跟起峰晚有关(28左右才起峰),二是扩增效率明显不如其他(可能是体系的原因)。至于曲线最后一个循环的折线,我个人认为厂家的说法说不通,既然说做融解曲线都这样,为何标准外参照的扩增动力学曲线没有这一折线。我做定量PCR时也做融解曲线,但分析软件会把融解曲线和扩增曲线分开,没有出现过这种状况。
fox_79 (2016-2-29 16:30:02)
请问哪里有关于染料法比较系统的资料,希望大家介绍一下,谢谢
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