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免疫透射比浊法测定血清胱抑素C
关键词：国家一级标准物质 国家环境标准物质 煤炭石油标准物质 中检所对照品免疫透射比浊法测定血清胱抑素C
【实验原理】
血清中CysC与超敏化的抗体胶乳颗粒反应，产生凝集，使反应溶液浊度增加。其浊度的增加值与血清中胱抑素C的浓度成正比，可在波长570nm处检测吸光度的增加速率，并与校准品比较，计算出CysC浓度。
【试剂与器材】
1．试剂I 每升内Tris 0．01mol、聚乙二醇6000 25g、氯化钠16g、NaN3 100mg。
2．试剂Ⅱ 羊抗人胱抑素C多克隆抗体胶乳颗粒悬浊液。
3．CysC标准品。
4．自动生化分析仪。
【操作步骤】
由自动生化分析仪进行检测，主要参数如下：透射比浊法，反应温度37℃，主波长546nm，次波长800nm，血清3pl，加试剂I 125μ1，混匀，孵育5分钟，再加试剂Ⅱ125μl，混匀，延滞时间60秒，监测时间90秒，记录吸光度增高速率(ΔA／min)。详细参数设置应根据自动生化分析仪及试剂盒说明书。
【结果计算】
1．标准曲线试剂盒配套的系列校准品，按操作方法进行测定，读取各浓度的ΔA／min，与相应的胱抑素C浓度绘制校准曲线。
2．算出测定管的ΔA／min，从标准曲线上查出胱抑素C的浓度。
【参考区间】
健康成年人血清(或血浆)胱抑素C浓度为0．59～1．03mg／L，建议各实验室建立自己的参考值。
【临床意义】
胱抑素c基因属“看家基因”，能在几乎所有的有核细胞表达，无组织特异性，因此机体胱抑素C产生率相当恒定。由于分子量小，经肾小球滤过后，在近曲小管被重吸收并降解，肾脏是清除循环系统中胱抑素的唯一器官，血清胱抑素C浓度主要由GFR决定，能够准确反映人体GFR的变化。ROC评价也表明胱抑素C的分析灵敏度和特异性均好于血肌酐及内生肌酐清除率，可用于糖尿病肾病肾脏滤过功能早期损伤的评价、高血压肾功能损害早期诊断、一肾移植患者t肾功能的恢复情况评估、血液透析患者。肾功能改变监测、老年人肾功能评价、儿科。肾病的诊断、肿瘤化疗中肾功能的监测等。
【注意事项】
1．样品血清或血浆(EDTA或肝素抗凝血)。室温(25~C)保存可以稳定6天，4℃可稳定12天，-80℃可稳定14个月以上。
2．采用非线性模式进行校准，使测定结果更准确可靠。 。
【评价与思考】
1．测定CysC早期有单向免疫扩散法及酶联免疫测定法，但灵敏度低。随后相继出现灵敏的放射免疫分析法、荧光免疫分析法、酶免疫分析法，属非均相检测，操作复杂且耗时长，不便于临床广泛应用，目前应用于临床的方法是胶乳颗粒增强免疫比浊法。
2．采用胶乳增强免疫比浊法，灵敏度比一般免疫比浊法高，其线性范围可达8mg／L，检测灵敏度为0．05mg／L，当样品浓度为0．53~2．02mg／L时，批内CV为1．4l％～1．09％，批间CV为2．10％~4．38％。血红蛋白<4．6g／L、维生素C<500mg／L、三酰甘油<l0mmol／L、胆红素<31 1μmol／L对本实验不产生干扰。
3．胱抑素C标准品的来源①从人尿液中纯化的胱抑素C；②纯化的人类胱抑素C用重组胱抑素C定值；③重组胱抑素C，溶于马血清中。用不同来源的标准品，参考区间会有一帘的善异．
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