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【求助】请高手指点为何会频繁出现此种污染?
最近刚开始进行细胞培养,我养的是前列腺癌PC3细胞,频频出现污染,每次污染发现的时候都是细胞形态已经基本上崩溃,散乱,然后在细胞之间发现细沙样的黑点,在低倍显微镜下显示非常小,从外观上看培养基比较浑浊,由于是菜鸟,就怀疑是操作原因,另外准备了六孔板将胰酶,血清,培养基,配好的完全培养基全部培养,最后发现是血清和配好的完全培养基出问题,在其中发现了絮状的黑团,扔掉重配后,前两天使用新培养基第一次传代,一传四,结果四瓶全部杯具。。。依然是从外观上看培养基非常浑浊,细胞中间出现细沙样的黑点。和之前的污染很类似,怕还是自己的操作出问题,于是在昨天请上一届师姐在一旁指点着做完了一次传代,中间有不对的请她即使指出,但是昨天发现依然出现这种类似的污染,请教各位,可能原因是出在哪?【求助】请高手指点为何会频繁出现此种污染?
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最新回复
00无名指00 (2015-1-29 15:49:32)
PS:目前每次操作的时间比较长,一次传代一传三,大约要1个多小时,这是不是很严重的一个因素呢?
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superboy (2015-1-29 15:52:01)
白色念珠菌?
kewanqi2011 (2015-1-29 15:52:21)
66小飞侠 (2015-1-29 15:52:46)
xueyouzhang (2015-1-29 15:53:15)
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我用的细胞株基本上是其他人传代时候传给我的,或者直接拿着其他人冻存的复苏的,但是其他人传代的同一批是不污染的,其他人冻存的复苏也是不污染的。请问如果是自己个人操作问题,那么最大的错误可能性会错在什么步骤呢?xueyouzhang (2015-1-29 15:53:37)
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原来怀疑是黑胶虫,但是听上一届人说黑胶虫污染的不会出现培养基浑浊,而我的每次污染都浑浊,请问如果是白色念珠菌污染,会表现为什么情况?一般是什么原因导致的呢?xueyouzhang (2015-1-29 15:53:59)
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我用的细胞株基本上是其他人传代时候传给我的,或者直接拿着其他人冻存的复苏的,但是其他人传代的同一批是不污染的,其他人冻存的复苏也是不污染的。请问如果是自己个人操作问题,那么最大的错误可能性会错在什么步骤呢?考拉乌拉拉 (2015-1-29 15:54:41)
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嗯,那真的是环境脏了么?建议趁过年有时间,把细胞间彻底用甲醛熏蒸一下,所有的枪,用的瓶子什么都换了吧,其他也没有什么办法了。。。ps:黑胶虫污染?只有国内才有人说这个东东。国外的文献有提到过这种东西么?
xingyi08 (2015-1-29 15:55:10)
00无名指00 (2015-1-29 15:55:41)
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请问如果怀疑培养基和血清什么的污染,要做培养检测有没有污染的话,怎么做?考拉乌拉拉 (2015-1-29 15:56:23)
PINK (2015-1-29 15:56:44)
天下虫子 (2015-1-29 15:57:03)
XYZQ (2015-1-29 15:57:31)
DDD (2015-1-29 15:58:03)
@花开花落@ (2015-1-29 15:58:29)
你们培养基买的还是配的?有条件就什么都换,没条件就什么都滤,1=3最多15min吧,如果一个小时,那叫我穿56皿的情何以堪呀!
mamamiya (2015-1-29 15:58:50)
把你的培养基和血清过滤一下,留个样检一下无菌,把操作台好好清理一下,用前紫外灭菌40分钟,一直开着风
考拉乌拉拉 (2015-1-29 15:59:25)
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同学你好,我现在是这样子做的,我请一名操作有把握的同学用我的培养基。血清、胰酶等进行操作,除此之外所有其他的瓶子、试管等都用他自己的,这样子排除其他任何可能造成污染的因素,结果这两天下来,没有发现污染,这样子,似乎可以排除我的培养试剂的问题了,我准备再接着用人家的东西进行一次培养,所有这些培养基,血清之类的都用别人的,这样子如果出现污染,那就可以确定是出在自己操作方面的问题,你看这样子可行么?考拉乌拉拉 (2015-1-29 15:59:46)
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同学你好,我现在是这样子做的,我请一名操作有把握的同学用我的培养基。血清、胰酶等进行操作,除此之外所有其他的瓶子、试管等都用他自己的,这样子排除其他任何可能造成污染的因素,结果这两天下来,没有发现污染,这样子,似乎可以排除我的培养试剂的问题了,我准备再接着用人家的东西进行一次培养,所有这些培养基,血清之类的都用别人的,这样子如果出现污染,那就可以确定是出在自己操作方面的问题,你看这样子可行么?米囡 (2015-1-29 16:00:13)
练手阶段总是各种不顺的,慢慢熟悉了就会好了
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