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【求助】绿脓杆菌（好氧菌、兼性厌氧菌）倾注培养

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-3-30 16:10    作者: QQ爱    来源: 分析测试百科网

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【求助】绿脓杆菌（好氧菌、兼性厌氧菌）倾注培养
1.我做的绿脓杆菌（好氧菌、兼性厌氧菌）倾注培养，稀释度做到-8、-9、-10、-11，只记录有明显特征的菌落发现菌落梯度不是很明显，几个梯度做的计数差不多，并且均大于30且不超过300，平板表面有很多可见的大菌落，但是有很多的小点生长培养基内部（附图如下），不确定是否是绿脓杆菌，如果记录，-8、-9、-10三个稀释度的菌落就会超过300，但是由于小点过小，计数十分困难，且培养多久均不能生长成容易计数的菌落。因此我做了小验证试验：将仅有小点的菌落切下一块放入LB培养基中摇瓶培养发现菌液变绿（绿脓杆菌液体摇瓶特征），菌液革兰氏染色也为阴性菌，且显微镜下显示绿脓杆菌特征。
2.请问除了增大稀释度还能如何处理这种情况，上述方法是否能证明小点是绿脓杆菌？计数时是否需要记录这些小点？是否有人做倾注时在其他菌上也有类似情况？
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  • zouyou (2015-3-30 16:11:03)

    若是再培养段时间，小点无明显变化（不形成菌落），就无需计数了。
    注意下菌液量与倾注量。

  • qinqinai (2015-3-30 16:11:34)

    根据我的经验：活化两次（一次固体划线，一次试管活化，35℃,220rpm,16h，培养基为肉汤培养基）的绿脓杆菌10倍稀释7次或8次,取100ul涂板足矣，计算出原菌液的数量级在10的九次方，前面的系数一般在3-6之间。

  • jishiben (2015-3-30 16:12:04)

    我用的不是肉汤，而是优化过的培养基，浓度高一点。肉汤的，我的一般做到八次方。:hand:谢谢您的回复。

  • yayayu (2015-3-30 16:12:34)

    1.首先确定你的菌是不是纯菌——划线接种分单菌落，鉴定单菌落；
    2.其次确定你的培养基有无污染——将空白平板倒置于温箱中培养72小时；
    3.再次确定你的培养过程有无污染——实验的每一个步骤都设置空白对照；
    4.最后确定你的原始样品中有无细小颗粒——食品、化妆品中常见。

  • QQ爱 (2015-3-30 16:13:06)

    以上都确定无误后，将纯菌在富营养培养基上（TSA常用）传代两次，将新鲜培养的细菌斜面洗下来（总量一般为10E9 CFU~10E11CFU,系列稀释到10E-10，接种10E-7~10E-9，一般可测出原始菌液浓度。
    培养48h以后，因为使用倾注法，在琼脂内部的菌落生长不良，一般呈细小的点，表面的因为接触空气，能长得饱满。
    希望能有用。

  • 大花猫bb (2015-3-30 16:13:48)

    你的培养基看起来就不太好。

  • 兔子 (2015-3-30 16:14:30)

    LZ你好，看你涂板长的绿脓杆菌形成一个个明显菌落，我最近涂板时候一直都只能看到一层绿膜，然而划线的话可以长的不错。可以告诉我你们用的什么培养基，然后用的什么溶液制成的菌悬液去倾注培养的吗？中间有什么要求注意的地方么，我不是学微生物的，很多不懂，希望能够得到你的帮助

  • 大花猫bb (2015-3-30 16:15:08)

    将平板拿到360nm±20nm的紫外线下观察，若发荧光，基本就证明了是铜绿假单胞菌。

  • jishiben (2015-3-30 16:15:40)

    用的是LB培养基，用生理盐水制成菌悬液（8.5g氯化钠/L蒸馏水），稀释度10-7、10-8、10-9，涂布要摇匀，培养基在40-50度，灭菌后保存在50度干燥箱中

  • QQ爱 (2015-3-30 16:16:16)

    太感谢了！我的LB培养基感觉比你的颜色深好多，然后最后的菌落每次都连成一片，实在是没办法。你涂布均匀后，有没有把表面上的液体烘干呢？

  • 妮子@ (2015-3-30 16:16:50)

    我用的是倾注培养，个人感觉涂布不好，操作要求比较高，你的LB可能是自己配的，我用的合成的，不过两种我都做过，没什么差别
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