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【求助】IPTG粉末是如何保存的？

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-6-18 17:42    作者: seven7    来源: 分析测试百科网

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【求助】IPTG粉末是如何保存的？
我现在用pet28a表达蛋白分子量大约为42KD的蛋白，刚开始能表达出来，后来就表达不出来了，试过很多温度和IPTG的浓度都不行，质粒拿去重新测序都是好的。现在怀疑是不是IPTG有问题，我的IPTG是购自生工的，粉末是保存在４度冰箱里的，配出的液体是存放到－２０度冰箱里的，这样保存会不会有问题啊？急急急
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  • wu11998866 (2014-6-18 17:42:37)


    我们实验室的IPTG一般是粉末和配置好的溶液都保存在-20度

  • bring (2014-6-18 17:42:55)


    IPTG这样保存没问题，我们也用生工的，我估计不是IPTG的原因，可能是基因本身的原因。我也碰到两例这种情况，具体原因还没找到。建议重新转化新的表达宿主菌（其它实验室的），最好有个阳性对照（其它可表达的质粒），重复实验一次试试看了。如果没表达，可能就不好办了。我也在查找原因之中

  • seven7 (2014-6-18 17:43:20)

    我们实验室就我自己在做啊,没有阳性对照,他们有的说是N端信号肽的问题,切掉就好了,不知道说的是什么意思?

  • tuuu2 (2014-6-18 17:43:42)


    同问，我也是遇到了这样的问题：基因导入pET载体中，但就是不表达目的蛋白……为什么呢？

  • mimili_901 (2014-6-18 17:44:15)

    如果你的序列中有信号肽序列，那就应该先把信号肽去掉，到NCBI中查一下你的序列信息或用软件预测一下序列的信号肽。一般来说，信号肽如果存在会影响在原核中表达的。
    信号肽分析：cuturl('http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/')
    试试看喽！

  • mimili_901 (2014-6-18 17:44:31)


    影响基因表达的因素很多，首先在ORF正确，基因测序正确的前提下，看看基因的是否存在稀有密码子，5‘端的二级结构。如果是用PET载体，试试Roseta序列的宿主菌。如果还是不行，看看融合表达行不，基因如果不表达的确很耗时间啊
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