求助！我做的ip总是得不到目的蛋白，请高手帮我分析

如题。最近一个月都在摸索ip。ip的抗体是我们找公司定制的，用于wb是没有问题的，是目的蛋白的肽段抗体。珠子是国产的，用量100微升。加30微升抗体孵育4度，4h+，再加入至少2mg的蛋白孵育4度过夜。pbs洗珠子三次后，直接加loading buffer煮沸上样。

上图泳道分别是marker-菌体总蛋白-ip-孵育珠子后的液体。方框是我的目的蛋白。每次ip的结果都是一团，即使减少上样量也不会改变。看大小也不是我的目的蛋白，请高手指导我。