近年来，新一代测序(NGS)技术的应用日益广泛。随着测序技术的不断改进，制备核酸和构建NGS文库的方法也在改进。对于各种文库制备方法，我们该如何选择?近日，美国斯克里普斯研究所的研究人员在《Biotechniques》上发表文章，比较了各种文库制备策略。
总的来说，在NGS分析之前，制备RNA或DNA的主要步骤包括：片段化和/或筛分指定长度的目标序列;将目标片段转化成双链DNA;在片段末端连上寡核苷酸接头;以及定量最终的文库。
DNA片段的大小是NGS文库构建的主要因素。DNA片段化主要是通过物理方法(如超声破碎)或酶学方法(即非特异的核酸内切酶处理)来实现的。作者将这两种方法进行了比较，发现它们都很有效。不过，与物理方法相比，酶学方法(Fragmentase)产生更多人为的插入缺失。作者还提到了Illumina的Nextera技术，认为它能够减少样品处理并节约时间。