赛默飞ETD技术发明人参加第十届乌普萨拉国际会议

2013-2-19 17:40 来源: 分析测试百科
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  2013年2月17日,第十届乌普萨拉电子捕获与电子转移裂解国际会议(UPPCON 2013)在北京友谊宾馆召开。UPPCON 2013是一个偏重质谱基础研究的国际会议,围绕离子-离子和离子-电子的气相反应的理论、实验、仪器开发和应用,数位最著名的资深的学者介绍他们最新的研究工作。

会议现场

赛默飞展台

赛默飞展板


赛默飞科技ETD技术发明人 John E.P.Syka博士

  赛默飞科技ETD技术发明人John E.P. Syka博士的报告题目是《Instrumental Approaches to Improving ETD Spectral Quality》,介绍了ETD技术的最近进展。

  介绍说,ETD基于离子/离子气相化学一种碎裂多肽的新方法,是鉴定蛋白及其翻译后修饰强有力的工具。ETD通过从阴离子自由基到质子肽转移电子的化学能量将肽碎裂,引发多肽骨干分裂,获得蛋白质翻译后修饰的重要序列信息。

LTQ Orbitrap 系统结构

  传统的诱导活化裂解(CAD)常用来鉴定蛋白,并试图确定和找到它们修饰的位点,但CAD技术有其固有的缺点。与线性离子阱的结合使用的ETD,可以很容易鉴定用CAD不能鉴定的多肽。

  ETD 是由电子捕获解离ECD 发展而来,但ECD 仅能在高端的FT ICR 高分辨质谱上使用,而ETD 的诞生,可以较为经济的在低分辨离子阱质谱上实现同样的功能。

  报告讨论了在质谱上提高ETD产生离子的数量的方法。分别从两个方面,一是最大化进入ETD的离子数量,一是最大化ETD产生的m/z离子的数量。

赛默飞Demo实验室 张伟博士

  赛默飞Demo实验室张伟博士介绍了《Method Development of Typical ETD Experiments for Proteomics Applications》的报告。

  张博士认为,ETD的发展非常迅速,能获得更丰富的系列碎片。在蛋白质组学等领域,ETD与CID是很好的互补,30%蛋白质组学的用户都在使用这个技术。

  ETD产生离子的反应机理

  ETD产生离子的反应机理很简单,当电子轰击氮气的时候,会产生一个热电子,热电子很容易被捕获,肽段发生断裂反应。相对于传统的CAD技术, ETD提供了更稳定的方法来定性PTMs,鉴定大型多肽或甚至整个蛋白质。ETD能够将普通翻译后修饰的多肽,或者多个碱性残基的多肽甚至整个蛋白质生成离子。 ETD也可以轻易碎裂含有二硫键的的多肽。

ETD中电子转移裂解原理

  ETD达到最佳状态的途径

  ETD实验达到最理想的状态,主要通过四个部分的调节,一是对ETD源的调谐和优化,二是建立合适的Tune文件,三是建立分析方法,最后是数据处理、搜库软件。

  ETD应用的例子

  CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT的磷酸化蛋白质组的分析。从老鼠睾丸体中取出全蛋白,通过胰蛋白酶分解后,用IMAC富集,然后数据处理就用PD Workflow。通过一系列的数据处理之后就得到所有谱图的鉴定结果。CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT三种策略也是很好的互补。

CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT的互补性

本文中所提到的厂商