【求助】为什么蛋白低分子量marker总是少一条带？

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• DONT (2014-6-18 17:49:19)

  我想问一下，是不是最下面的那一条带没有呢？
  多数人跑胶下面的条带都由于这样那样的原因跑不出来，所以我想多数不是marker的原因，而是跑胶的问题。
  

• windy+++ (2014-6-18 17:49:36)

  
  我觉得是最后一条带蛋白已经跑出去了。如果loading buffer中的溴芬兰跑出去的话， 低分子量蛋白可能也跑出去了，可以试试在溴芬兰跑到底之前0.5厘米停止，或者是用三层胶SDS-PAGE

• 小游abc (2014-6-18 17:49:55)

  
  多数情况都不是marker的问题
  跑胶的时候，小分子的那条marker和溴芬兰不容易分开的
  也有可能是分离胶所用的Tris－HCl的pH值不准确导致的，不过这种情况是好几条marker都无法分开。曾经有一次我们的试验就出现这个结果，用的12％的胶下面3条marker都没有分开来，而正确的pH条件下，10％的也是可以把所有marker都跑开的

• 小游abc (2014-6-18 17:50:12)

  
  多数情况都不是marker的问题
  跑胶的时候，小分子的那条marker和溴芬兰不容易分开的
  也有可能是分离胶所用的Tris－HCl的pH值不准确导致的，不过这种情况是好几条marker都无法分开。曾经有一次我们的试验就出现这个结果，用的12％的胶下面3条marker都没有分开来，而正确的pH条件下，10％的也是可以把所有marker都跑开的

• wmp1234 (2014-6-18 17:50:28)

  
  这种问题我也遇见过，一般厂家得广告都是用的预制得梯度胶，效果当然好了，那些低分子量得也能跑开，而我们在实际实验中很难用到梯度胶，这样经常最低分子的回跑不出来

• 131415 (2014-6-18 17:50:45)

  我在作PAGE时，也出现过这样的问题，没有出现的 maker带在溴芬兰中，没有跑开，而不是跑出去了，有时有4条，有时有5条，有的时候只有3条，根据我的经验，用10%或12%的胶都是可以的，但不知你用的是哪种电泳仪，最好速度稍慢一些，电流控制在30mA以内，小胶的话跑2个多小时可OK，另Tris的PH一定要准确。

• wood533 (2014-6-18 17:51:03)

  
  我们实验室用的是这一品牌的电泳仪和低分子量Marker.
  用12%的胶一般都能出现六条的,要么是配胶缓冲液有问题.如果其它没问题,提高胶浓度到15%肯定能出来.

• wsll (2014-6-18 17:51:18)

  
  你换一个厂家的marker试试不就知道是什么原因了吗？也许是marker本身的问题呢？

• ladyhuahua (2014-6-18 17:51:39)

  
  如果是最后一条带没有了，，提高一点分离胶的浓度就行了

• any333 (2014-6-18 17:51:55)

  
  谢谢大家的指教，真得很感动！我用的电泳仪和电泳槽都是国产的，六一仪器的。我重新配了缓冲液重新跑胶呢，结果还没有出来。我觉得好像是没有最后一条带。我想把图谱贴出来，但不知道怎样才能贴出来。

• 小鱼鱼 (2014-6-18 17:52:14)

  marker六条带的蛋白量是不一样的，你可以多上些。另外，最后一条marker和溴芬兰的线在低浓度胶是很接近的，有时不容易分。还有就是你缓冲液的PH要正确

• xue258 (2014-6-18 17:52:31)

  我也用六一仪器的电泳仪和电泳槽。
  开始上样5ul也是只跑出四条带，后来我上样7.5ul就跑出了六条带了。
  你可以多上点样试试！
  如果实在跑不出来，我可以告诉你看不到的是分子量最小的条带。