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酸性磷酸酶米氏常数的测定（一）
关键词：证书标准物质 浊度标准物质 食品添加剂检测 农药标准物质酸性磷酸酶米氏常数的测定（一）
【实验原理】
酶浓度、pH值、温度等条件固定的情况下：底物浓度较低时，反应速度随底物浓度增加而升高，近似成正比，符合一级反应；当底物浓度较高时，随底物浓度增加反应速度升高不显著；当底物浓度很大时，反应速度不再随底物浓度增加而升高，达到最大反应速度，符合零级反应。米氏方程表示了底物浓度和反应速度之间的关系。
测定不同磷酸苯二钠浓度时的ACP活性，再用米氏方程双倒数方程：
作图，以1／V为纵坐标，1／[S]为横坐标。在l／[S]与l／V图中查出直线在横轴上的截距一1／Km，在纵轴上的截距1／Vmax，计算求得ACP作用于磷酸苯二钠的Km与Vmax值。
【试剂与器材】
1．酚标准贮存液(1mol/L) 称取结晶酚，用0．1mol/L的HCl溶解，并加至总体积后，标定(标定方法：取酚试剂5.0ml，加蒸馏水约50ml，以酚酞作指示剂，用1．0mol/L的NaOH溶液滴定，求出酚试剂的酸度；最后用蒸馏水定容，使最终的酸度为1．0mol/L)。
2．酚标准应用液(0．4mmol/L)用标定后的酚标准贮存液加蒸馏水稀释而成。
3．0.1mol/L的碳酸盐缓冲液(pH 10)称取无水碳酸钠6．36g，碳酸氢钠3．36g，用蒸馏水溶解并稀释至lL。
4．4-氨基安替比林(4．AAP)溶液 称取4-氨基安替比林6g，用蒸馏水溶解并定容至1L，置棕色瓶中冰箱保存。
5．高铁氰化钾溶液称取高铁氰化钾48g，硼酸28g，各自溶解于400ml蒸馏水中，两液合并后再加蒸馏水至1L，置棕色瓶中保存。
6．5mmol/L磷酸苯二钠溶液称取磷酸苯二钠0．635g，加入500ml煮沸的蒸馏水中，冷却后加氯仿2ml防腐，冰箱保存。
7．0．1mol/L柠檬酸溶液(pH 5．0)称取柠檬酸21．014g，加蒸馏水溶解并定容至1L。
8．0．1mol/L柠檬酸三钠溶液(pH 5．0)称取柠檬酸三钠29．410g，加蒸馏水溶解并定容至1L。
9. 0.1mol／L柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液(pH 5．0)每100ml缓冲液按0．1mol/L柠檬酸溶液41ml加0．1mol/L柠檬酸三钠溶液59ml配制而成。
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