质谱沙龙第三十期活动报道

2011-3-28 17:39 来源: 分析测试百科
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  2011年3月27日,第三十期质谱沙龙活动在第二炮兵总医院药学部成功举行。来自第二炮兵总医院、空军总医院、解放军第309医院、北京安贞医院、北京大学医学部AB SCIEX公司、天津博纳艾杰尔科技有限公司、北京艾米诺医学研究有限公司、美东生物(AOBO)公司等二十余位专家、学者、技术工程师等参加了本次沙龙活动。

第三十期质谱沙龙活动现场


质谱沙龙回顾及展望、LC-MS/MS定量分析中的几个问题探讨

  解放军第二炮兵总医院李鹏飞老师主持沙龙活动并作了题为《质谱沙龙回顾及展望、LC-MS/MS定量分析中的几个问题探讨》报告,首先回顾了质谱沙龙活动三年多来所开展的工作,规划了今年的活动安排,展望了质谱沙龙的美好前景;而后,李老师重点介绍了他在分析研究中遇到的几个问题,与大家一起分享、讨论了他的做法和见解。

解放军第二炮兵总医院 李鹏飞 老师

  质谱沙龙活动回顾与展望

  质谱沙龙活动自2007年9月发起,由第二炮兵总医院药学部主办,北京师范大学分析测试中心、AB SCIEX公司、艾米诺医学研究有限公司等协办。沙龙的宗旨是构建有机质谱一线使用人员交流平台,坚持无偿公益的原则。质谱沙龙活动主要以专题报告和实际问题自由交流的形式为主,29期的百余篇专题报告以小分子化合物、大分子蛋白、中药单体/组方等为研究对象,介绍了药物研发、临床药代、食品安全、中毒监测等应用方向及其LC/MS新技术、新方法等。

  2011年度质谱沙龙规划与展望:计划5期质谱沙龙活动,每两月举行一次;小分子定量质谱实验室多中心室间质评;从四本有关质谱及其应用的英文书籍中选择一本进行翻译;6月中旬举办第二届质谱沙龙联谊会;推出沙龙总结及专家团队介绍彩页,加强宣传和交流;进一步完善管理团队、专家团队、一线报告团队和组织团队,加强管理、走向正规。希望更多的朋友能参与进来,提供更高、更好、更贴近实际的报告,集思广益,把质谱沙龙建成一个更自由、更活跃、更高层次的交流平台。

  LC-MS/MS定量分析中的几个问题探讨

  李老师首先讲了雷奈酸和雷奈酸锶的问题。雷奈酸锶是治疗骨质疏松的一个药物,主要是锶在起作用,雷奈酸和锶结合后容易进入到人体内。对于雷奈酸和雷奈酸锶,临床药代实验都是要做的,锶建议采用无机质谱做,如ICP-MS等,雷奈酸用液质做。经过前期实验,李老师发现不管是正离子扫描还是负离子扫描,在预定的位置都没有出峰,添加离子化试剂,也没有峰出现。雷奈酸有四个羧基,有个氰基,还有个硫,按道理应该有峰出现,为什么就没有质谱峰出现?后来李老师通过原创方法,优化色谱条件,得到一个比较漂亮的谱图。分析验证,能够满足临床药代的需求。李老师说这个问题是想告诉大家,当用常规质谱方法不能奏效时,就要换个思路,如试试气质、液相、荧光、衍生化等方法。

  是无机元素,在环境中肯定会存在,在体内也会存在。在空白和本底里都有锶的存的,那么测完之后的评价就是一个难题,要用空白添加法的话,标准曲线就没办法做。给完药后不同时间点测的结果减掉零点空白合适吗?我给药后可能采样持续一周,这中间吃饭也可能有锶进入体内,这时锶的浓度可能就会升高,都是有影响的。李老师查了这方面的相关文献报道,一些老师做的钾、钠等,同样有这个问题。减这个点到底怎样减,是减空白值,还是减平衡值,拿平衡值减甚至可能减出负数来,还有坐标曲线都不好做。是用空白点去做,还是用溶液的曲线去做,或是先拿溶液把量定出来,再加上空白等等,这些都和常规的药代是有区别的,我提出这个问题供大家来讨论。我采用空白添加法做这个曲线,然后用这个曲线的响应值减去空白曲线的响应值,得到的曲线完全就是加进去药的曲线,实际样本测出来后,对应的点单减去空白。不同的人有不同的做法,这本身就是一个很争议的问题。

  接着,李老师又讲了一个氯吡格雷的问题。氯吡格雷是一种前体药,氯吡格雷经氧化生成2-氧基-氯吡格雷,继水解形成活性代谢物(一种硫醇衍生物),约占约15%左右;另外还有一种非活性代谢物羧酸盐衍生物,约占85%,剩下的氯吡格雷1%左右。对三个对照品都做是最好的,其中氯吡格雷和羧酸盐衍生物比较容易检测,故筛选其中两个去做。当给药是75mg时,体内羧酸盐衍生物是3000ng;当给药是150mg时,体内氯吡格雷是2ng,两者悬殊3000倍。高通量质谱可以同时做,但有点勉强,最后选择了分开做。高浓度稀释后做,非活性浓度特别高,采用一个短柱做,六七百个药物两三天就做完了;浓度低用梯度方法做,而且响应值也做的很好,这样既不用很勉强去做,也能很快做完。

  最后,李老师介绍了免疫抑制剂环孢素A。环孢素A是临床移植等用的药物,这种药物需要现场监测,因为它用药范围非常窄,高点或低点都会有问题,低了免疫性能丢失。采用博纳艾杰尔的蛋白沉淀板,是个很简便的方法,将样品上到板上,然后给一个涡流负压抽过去,就可以直接上质谱检测了。李老师分别对HPLC-MS/MS法和TDx分析方法测定全血中环孢素A及MAS沉淀板与蛋白沉淀质谱法测定全血中环孢素A进行了比较。最后得出的结果比较:HPLC-MS/MS法约是TDx的55%,MAS沉淀板法稍微比蛋白沉淀质谱法高7~8%左右,不论哪种方法都有稳定的比值。


I期临床实验室简介及工作中的问题探讨

  北京安贞医院药物临床试验机构李静老师作了题为《I期临床实验室简介及工作中的问题探讨》的报告,介绍了I期临床实验室的相关情况,与大家一起探讨了在工作中如何解决基质效应问题、污染问题等。

北京安贞医院药物临床试验机构 李静 老师

  I期临床实验室简介

  药物临床试验机构于2006年9月12日通过国家药监局的资格认定,I期临床实验室简介设有精密仪器室、实验准备室(样品处理室)、离心机室等。实验室有Agilent 1100高效液相色谱仪、3200 QTRAP质谱仪、WaterPro PS/HPLC纯水器、Sigma 低温高速/低温低速离心机、精密电子天平、低温冰箱等主要一起设备,并配有Agilent 固相萃取仪、氮气吹干仪、奥利龙pH计、恒温培养振荡器和精密加样器等小型配套仪器,还有DAS、WinNonlin、SPSS、SAS等数据处理工具。

  解决基质效应问题

  关于基质效应的问题,李老师以新型二氢吡啶类钙通道阻滞剂为例,该类化合物化学性质不稳定,见光易分解。实验时加入尼莫地平为内标,样品前处理用蛋白沉淀法,采用ESI源质谱和Agilent Extend-C18色谱柱。上述条件方法考察5天,准确度与精密度、稳定性等考核均符合要求;15天后临床生物样本采集完毕,开始测定后发现测定完一批生物样本后质控样本测定不合格,被测物和内标响应均降低。

  那该怎样克服基质效应的影响?一般方法是:改变被测物的色谱分离条件;选择合适的样品预处理方法,考虑沉淀蛋白法虽提取药物效率高,但同时也引入很多看不见的杂质,故样本前处理改用液液萃取法;稳定同位素内标;采用小样进量,约为10µl;利用液相色谱电解质效用。

  解决污染问题

  接下来,李老师向大家介绍了实验中应如何避免污染问题及注意事项。样品处理过程中怎样避免工作液配制污染,氮吹仪、加样枪头及加样过程引入的污染?注意操作台面清洁,手套污染及时更换或勤洗手;氮吹仪吹干时尽量不要让针孔伸到溶液液面之下,气流缓慢增大;加样时要从低浓度向高浓度操作。样品测定过程中怎样避免洗针液、流动相和进样器六通阀的污染?及时清洗试剂瓶,更换新溶液;规范洗针程序。接着,李老师又谈到了实验中要注意的几个事项:精密仪器日常维护(机器除尘、控制室内温湿度、气体供应是否充足、更换泵油等),仪器定期进行校准检验,咨询专业人士和详细记录遇到的问题等。

  最后,李老师提出了生物样本存储时间,生物样本储存期满后的处理方式,脉冲梯度色谱技术和液相色谱电解质效应等四个问题,供大家讨论。