【分享贴】WESTERN BLOT中一个节约银子的新招

最新回复

• qianqin1977 (2014-4-16 14:54:01)

  
  我就是不知道用封闭液(含5%脱脂奶粉的TBST)稀释的第一第二抗体到底能在4度放多长时间啊,你确认能放那么长时间吗,我都是放一周就扔了,看来很可惜哦

• ukonptp (2014-4-16 14:54:31)

  sorry，我忘了说了，我们用的是直接从公司买的blocking buffer，不是用脱脂奶粉配的，这样看来这个很重要了，如果是奶粉又不加防腐剂的话，应该是不能一直用一年的.不过如果把费用计算一下，看看是买blocking buffer贵还是买抗体贵，就可以作个选择了.

• fei1226com (2014-4-16 14:55:10)

  
  嗯,我之前有看到过国内有个公司有卖这种blocking buffer,而且价格不贵,好像是50ml70块,呵呵,不过当时觉得抗体够用,而且说抗体只能存放一年,所以就没有买.抗体的保质期真的只有一年的吗?

• greenbee (2014-4-16 14:55:30)

  就这个新招啊,
  重复用一年也太夸张了吧?!这也要看抗体的效价,就象一抗,,如果1:1000能做出来，但是是以1:100稀释的,确实能用很多次,每一次加一抗都是一次损耗,
  用长时间了也不行,

• wmp1234 (2014-4-16 14:56:32)

  
  时间用长了会长绿毛，呵呵。但是一般两三个礼拜应该没有问题。

• xue258 (2014-4-16 14:56:48)

  
  我们一抗是１：２０００稀释的哦

• abc816 (2014-4-16 14:57:45)

  你在哪家公司买的Blocking Buffer？谢谢！

• ukonptp (2014-4-16 14:58:03)

  
  是Odyssey公司的买的，一瓶500ml的要1800瑞典克郞吧，不过如果可以重复使用也就相对不贵了，尤其是节省一抗和二抗啊！

• fsdd817 (2014-4-16 14:58:25)

  这个也跟使用抗体的温度有关吧，我们一抗4度过夜，通常都重复使用
  二抗室温，用完就扔。。。抗体在室温容易降解

• nvdabing (2014-4-16 14:58:51)

  
  才知道可以这样，可以考虑试试

• 蒲公英 (2014-4-16 14:59:52)

  
  我用的一抗是血清，一大把都用不完，感觉用100年都绰绰有余，呵呵！
  二抗室温使用，不敢重复用啊

• ukonptp (2014-4-16 15:00:10)

  我的一抗和二抗都是在室温使用的,但保存在4度.

• one (2014-4-16 15:00:26)

  
  瑞典克朗什么概念啊？现在不是统一用欧元了吗？

• ukonptp (2014-4-16 15:00:44)

  大概现在瑞典克朗：人民币＝１１０：１００

• wmp1234 (2014-4-16 15:01:08)

  放在4度杂？？
  室温杂一小时 -20保存下次一样也可以用

• flower-201 (2014-4-16 15:01:38)

  
  防腐剂推荐用10ul氯仿/ml。效果不错，还不影响蛋白活性。NaN3影响HRP，所以少用为好。

• mamamiya (2014-4-16 15:02:44)

  做WESTERN BLOT时，一抗二抗是笔不小的开销.我现在才发现有一个节约银子又增加实验效果的好办法，简言之，即是重复使用一抗和二抗.这样即可节约，多次使用还可以减少背景（我们实验室的一二抗可以重复使用一年以上，效果还很好哦！）.但我们现在用的是ODESSEY的荧光扫描系统，不知道用X光片的方法是否也同样管用.如果有战友试过，可以一同分享结果.
  
  在特定的环境下，节约实验经费是很重要的啊！
  
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  小弟对此有些相左的看法（仅供交流）！
  1、抗体重复利用看来是很经济，但是这样的可重复性较差（抗体稀释倍数未知）。除非你的样品对抗体没有太高的要求。
  2、“可以降低背景”，个人（实验也证实）认为背景的高低与一抗的工作浓度有很大关系。就您的观点来说，您的实验参数没有优化好。
  3、“商业用Blocking”大概是3元/mL，核算一下吧！
  4、最重要的是，我认为这种方法只适用于商业（尤其是对外服务，不知道您说的"特定的环境"指这方面？是不是成本核算？）。对于实验室来说还是不合适的，一个实验重复10次了不起了。那还用把抗体放一年的哦？
  5、建议新手还是规矩一点，按部就班做实验；等积累了一定的经验后再参考也不迟！
  为了实验我们共同出谋划策！不知其他战友有何高见！

• sunnyB (2014-4-16 15:03:16)

  
  请问我是PBS和胎牛血清配制的一抗/PBS配制的二抗,放在4度冰箱里面保存,这样的一抗和二抗能重复利用吗?

• ukonptp (2014-4-16 15:03:45)

  
  与朋友讨论时也谈到了重复使用一抗二抗的问题，我忘了考虑一点，就是在瑞典空气非常干净，平时大家做细菌接种时都可以不用酒精灯，直接在普通实验台上操作都可以了，这在国内是不能想象的。所以我想这一点大家也要考虑一下，最好自己做些预实验试试。
  有朋友问到Blocking buffer的问题，我在网上找到了相关的内容，帖上来大家看看，希望有用。

  
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• ukonptp (2014-4-16 15:04:16)

  
  再发一张实物照片

  
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