【讨论帖】细胞培养基本问题

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冷冻管应如何解冻? 谢谢大虾们!


[ 本帖最后由 fox_79 于 2014-12-4 15:24 编辑 ]
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最新回复

  • 园丁## (2014-12-04 15:05:28)

    QUOTE:

    原帖由 fox_79 于 2014-12-4 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    冷冻管应如何解冻? 谢谢大虾们!

    取出冷冻管后, 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。
  • idea2011 (2014-12-04 15:05:48)

    细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO?
  • 园丁## (2014-12-04 15:06:15)

    QUOTE:

    原帖由 idea2011 于 2014-12-4 15:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO?
    除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在解冻之后, 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中, 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
  • fox_79 (2014-12-04 15:06:36)

    园丁站友,可否使用与原先培养条件不同之培养基?
  • 园丁## (2014-12-04 15:07:06)

    不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基, 细胞大都无法立即适应, 造成细胞无法存活。
  • fox_79 (2014-12-04 15:07:31)

    可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
  • 园丁## (2014-12-04 15:07:48)

    QUOTE:

    原帖由 fox_79 于 2014-12-4 15:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
    不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源, 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
  • dragonkilly (2014-12-04 15:08:17)

    想借这个帖子问下,何谓FBS, FCS, CS, HS ?
  • 园丁## (2014-12-04 15:08:38)

    QUOTE:

    原帖由 dragonkilly 于 2014-12-4 15:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    想借这个帖子问下,何谓FBS, FCS, CS, HS ?  
    FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 两者都是指胎牛血清, FCS 乃错误的使用字眼, 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。
  • 00无名指00 (2014-12-04 15:09:02)

    培养细胞时应使用5 % 或10% CO2?或根本没有影响?
  • 园丁## (2014-12-04 15:09:20)

    一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统, 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时,细胞培养时应使用10 % CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时, 则应使用5 % CO2 培养细胞。
  • 00无名指00 (2014-12-04 15:09:34)

    那何时须更换培养基?
  • 园丁## (2014-12-04 15:09:59)

    QUOTE:

    原帖由 00无名指00 于 2014-12-4 15:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    那何时须更换培养基?
    视细胞生长密度而定, 或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。 8 培养基中是否须添加抗生素? 除于特殊筛选系统中外, 一般正常培养状态下, 培养基中不应添加任何抗生素。
  • birdfish (2014-12-04 15:10:16)

    附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度?应如何处理?
  • glass (2014-12-04 15:10:40)

    QUOTE:

    原帖由 birdfish 于 2014-12-4 15:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度?应如何处理?
    一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中, 保存于–20 °C,避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低, 并可减少污染之机会。
  • dodoit (2014-12-04 15:10:59)

    请问,悬浮性细胞应如何继代处理?
  • 园丁## (2014-12-04 15:11:23)

    一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中, 稀释细胞浓度即可, 若培养液太多时, 可将培养角瓶口端稍微抬高, 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶, 加入新鲜培养基稀释至适当浓度, 重复前述步骤即可。
  • ROSE李 (2014-12-04 15:11:40)

    欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?
  • 园丁## (2014-12-04 15:12:04)

    QUOTE:

    原帖由 ROSE李 于 2014-12-4 15:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?  
    欲回收动物细胞, 其离心速率一般为300xg (约1,000rpm),5 - 10 分钟, 过高之转速, 将造成细胞死亡。
  • yueban-1147 (2014-12-04 15:12:22)

    细胞之接种密度为何?
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