【求助】磷酸钙转染细胞，用甘油休克的目的是什么？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-1-29 16:06 作者: ququer787 来源: 分析测试百科网

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【求助】磷酸钙转染细胞，用甘油休克的目的是什么？

钙转细胞一直有几点不明白
1.这里的休克是什么意思？原理是什么？
2.转染之后，应该先用PBS洗，还是先休克？
3.转然之后第二天，总是看到黄黄的一层物质附着在细胞表面，是不是没洗干净的原因？

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最新回复

orangecake (2015-1-29 16:06:59)

首先，钙转之前需要抑制溶酶体功能，防止你的质粒被降解，其次改善细胞功能使颗粒更容易进入细胞。甘油或者DMSO shock无非就是增加进入细胞的质粒量。但是我并没有看到关于以上所说两种方法的比较。由于我只采用过先加氯喹然后钙转染的方法，所以你的第三个问题我无法回答。第二个应该是转染后培养三四个小时，换成10%甘油的PBS培养1分钟，然后再换成培养基。
koook5695 (2015-1-29 16:07:29)

首先，钙转之前需要抑制溶酶体功能，防止你的质粒被降解，其次改善细胞功能使颗粒更容易进入细胞。甘油或者 ...

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请问如何抑制溶酶体的功能？
加氯喹的目的是什么？
dior (2015-1-29 16:07:59)

QUOTE:
原帖由 koook5695 于 2015-1-29 16:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
首先，钙转之前需要抑制溶酶体功能，防止你的质粒被降解，其次改善细胞功能使颗粒更容易进入细胞。甘油或者 ...

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请问如何抑制溶酶体的功能？
加氯喹的目的是什么？ ...
就是为了抑制溶酶体功能
911 (2015-1-29 16:09:05)

QUOTE:
原帖由 dior 于 2015-1-29 16:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

就是为了抑制溶酶体功能
噢，谢谢你，还有一个问题，甘油或者DMSO如何增加质粒的进入量，原理是什么？
IAM007 (2015-1-29 16:09:41)

转染试剂不可以做嘛
orangecake (2015-1-29 16:10:03)

QUOTE:
原帖由 IAM007 于 2015-1-29 16:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
转染试剂不可以做嘛
干扰膜功能，在具体我也不知道了。
pou (2015-1-29 16:10:35)

QUOTE:
原帖由 IAM007 于 2015-1-29 16:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
转染试剂不可以做嘛
脂质体转染对细胞的毒性很大，最近有篇文章说具有off-target的效应，如果做形态学观察，就不太合适。
utt0989 (2015-1-29 16:11:40)

QUOTE:
原帖由 pou 于 2015-1-29 16:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

脂质体转染对细胞的毒性很大，最近有篇文章说具有off-target的效应，如果做形态学观察，就不太合适。

哦我们做的还可以 polifect