【求助】为什么我重复师姐的PCR实验，就是出不了条带

最新回复

• baidukk (2015-2-15 20:54:40)

  
  一步一步检测确保cDNA、引物和PCR的试剂没问题，再看看引物与模板的匹配度

• kewanqi2011 (2015-2-15 20:55:08)

  
  你的mRNA没有提好，可能降解了

• summerxx (2015-2-15 20:55:31)

  你的模板有问题。

• standbyme (2015-2-15 20:56:45)

  有没有二聚体，什么都没有的话很可能就是引物问题！

• mogu (2015-2-15 20:57:16)

  QUOTE:

  原帖由 baidukk 于 2015-2-15 20:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  一步一步检测确保cDNA、引物和PCR的试剂没问题，再看看引物与模板的匹配度

  cDNA模板给别人用了，能够出他们需要的条带。引物我现在还是定了跟师姐一样的，毕竟她做出来过。是不是存在我提出的模板并不适合他的引物的情况？

• mogu (2015-2-15 21:00:24)

  QUOTE:

  原帖由 standbyme 于 2015-2-15 20:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  有没有二聚体，什么都没有的话很可能就是引物问题！

  所提的模板别人都可以用而且效果很好。二聚体不明显，提温的话二聚体明显

• mogu (2015-2-15 21:00:41)

  QUOTE:

  原帖由 summerxx 于 2015-2-15 20:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你的模板有问题。

  给别人用效果很好

• seagate (2015-2-15 21:00:59)

  事RT的cDNA第一链做模板的吧？你的模板全长有多长？P的片段有多大？别人P的片段有多大？还有就是你的目的片段对应的RNA丰度有多大？我这段时间做RT也出现了类似的问题，之前P出来了，可是后来用相同的条件就P不出来了..........
  

• zhenxin (2015-2-15 21:01:27)

  QUOTE:

  原帖由 seagate 于 2015-2-15 21:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  事RT的cDNA第一链做模板的吧？你的模板全长有多长？P的片段有多大？别人P的片段有多大？还有就是你的目的片段对应的RNA丰度有多大？我这段时间做RT也出现了类似的问题，之前P出来了，可是后来用相同的条件就P不出来了..........
  ...

  我如今也是这般情况，相同条件下，之前p出来的东西再也不见了，郁闷死了

• nikonun (2015-2-15 21:03:37)

  cDNA模板给别人用了，能够出他们需要的条带。引物我现在还是定了跟师姐一样的，毕竟她做出来过。是不是存 ...
  
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  我以前也遇到过这种情况 cDNA P别人的P得出 P我的就P不出 换cDNA试试吧
  

• vcve (2015-2-15 21:06:12)

  我如今也是这般情况，相同条件下，之前p出来的东西再也不见了，郁闷死了
  
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  后来我这个问题解决了，换了只酶就好了，可以用之前P的产物做模板，但是要适当上调退火温度，下调退火时间，这样特异性高一些，PCR产物稀释100倍的样子OK，还有就是cDNA第一链放久，似乎对一些相对较大片段（接近2K）的PCR不利，现做现用最好