查看完整版本请点击这里：
维生素K的测定（三）
关键词：食品安全检测 农药标准物质 无机标准样品 进口标准物质维生素K的测定（三）
4．操作步骤(所有操作均需避光进行)
①样品处理
a．新鲜蔬菜：拣净去杂物，将可食部洗净，擦去表面水分，切碎，用打碎机制备成匀浆。
b．干制植物性样品：磨碎，过60目筛。
②样品提取
a．称取已打成匀浆的新鲜样品2～10 g(维生素K，含量不低于2µg)，加到具塞锥形瓶中，再加入5～10倍体积的丙酮，盖上塞子，振摇3～5 min，静置1 min，以下按洗涤步骤操作。
b．称取干制植物性样品0．2～4 g(维生素K，含量不低于2µg)，加到研钵中，再加入2～4倍于样品的无水Na2SO4研磨均匀后，加入25 m L丙酮，研磨3～5min，静置1min。(注意：对于细胞壁比较厚的样品，如藻类食品，可先用石英砂研磨，破坏植物组织细胞。石英砂需进行预处理，将石英砂用20目筛子过筛之后，先用浓盐酸浸泡，然后再用稀氨水浸泡，最后用蒸馏水洗至中性后在烘箱中烤干。使用时，每10 g样品加3～5 g石英砂于研钵中研磨。)
③洗涤：将样品提取液的上部澄清液倒入已装有50～100 mL 0．14 mol·L -1Na2S04溶液的分液漏斗中，残渣再用丙酮提取2～3次，每次用量不少于25 mL，上层清液并人分液漏斗。残液继续用石油醚洗涤3～4次，每次用量约25 mL，至洗涤液呈无色，将洗涤液倒人同一分液漏斗中振摇1 min，静置。弃水相，有机相用蒸馏水洗涤4～5遍，至水相澄清。弃水相，将有机相经无水Na2S04脱水后转至旋转蒸发瓶中，于60℃水浴中减压蒸馏至约20 m L时取下，立即用氮气吹干，用石油醚定容至2．0 m L，待净化。
④装柱：取干燥色谱柱，将验证好的氧化铝浸泡于石油醚中，湿法填充于色谱柱，使氧化铝自由均匀流下，至柱高为20 cm时，其上端再加2 cm无水Na2S04。打开活塞，调整流速为每秒1滴。一根色谱柱只用于一个样品测定。
⑤色谱净化：待石油醚流至上端O．5 cm时，加V1mL样品提取液，当样品液流至柱平齐时，加2 mL石油醚冲洗柱壁，流下。再加10 m L石油醚洗脱，2次，弃除流出液。然后，用30m L洗脱液洗脱，用旋转蒸发瓶收集流出液。流出液于旋转蒸发器浓缩近干，取下用氮气吹干后，用正己烷定容为V2mL。将定容液移入小塑料离心管中，5 000 r／min离心5 min，上清液供HPLC分析。
⑥标准工作曲线的绘制：分别取维生素K1标准应用液O．5、1．0、2．0、4．0、6．O、8．0、10．0mL，加入分液漏斗中，按样品和洗涤步骤提取、浓缩定容至2．0 mL，即标准工作曲线中各点维生素K，含量分别相当于5、10、20、40、60、80、100µg／mL。然后再按色谱条件进行HPLC测定，记录峰面积或峰高。以标准含量为横坐标，峰面积或峰高为纵坐标绘制标准工作曲线。
查看完整版本请点击这里：
维生素K的测定（三）
维生素K的测定（三）
维生素K的测定（三）