【求助】谁能帮我解释下图片的意思啊

最新回复

• 一叶 (2015-4-03 09:54:04)

  
  这是关于酶切位点保护碱基的表，基本意思是，就举Acc I 和Afl III 为例吧，我们设计引物的时候，先把引物根据模板设计好，然后再将酶切位点加在5‘端，即Acc I ---GATC------  或者Afl III ---GATC----，如果这样的引物，在你PCR结束后，酶切位点的5’是没有碱基的，这样的话拿去酶切会影响酶对该位点的切割，我们知道限制性内切酶都有序列识别结构域和序列切割结构域，这样的话，虽然酶能识别相应序列，但由于酶切位点5’端裸露，酶却不能切割，顾为了使酶能够顺利切割，而额外几个碱基，叫保护碱基，那么保护碱基加几个才能起到保护作用呢，这就更具体的限制酶有关了，有点不需要，有的一个就行了，有点两个或者三个，有点甚至四五个还不行，你比如，上表中Acc I加3个切割效率还是为0, 而Afl III两个就足够了，而Asc I不需要加，至于要不要加保护碱基，加几个，具体的酶具体分析
  希望对你有用！

• okhaha (2015-4-03 09:54:21)

  红色是酶的序列，两边黑色的是保护碱基，不同的酶用不同的保护碱基，有的两边加一个，有的加两个。。。，加的保护碱基数不同，酶在相应的时间内的酶切效率不同。所以这表告诉你得选择合适数量和特定的保护碱基。
  

• dog002 (2015-4-03 09:54:41)

  
  一般保证是三的倍数，不至于移位。

• hyuu (2015-4-03 09:55:01)

  
  2楼已经说的很清楚了

• bring (2015-4-03 09:55:26)

  选酶切位点时用考虑表中的切割率吗？切割率低的是不是尽量不用？最近在学习设计引物，求解答。。。
  

• cj_mondy (2015-4-03 09:55:49)

  酶切位点和保护碱基，在构建载体的时候要考虑，尤其是在用PCR克隆设计引物的时候。
  2楼说的已经非常详细了！
  

• dotaaa (2015-4-03 09:56:17)

  这是关于酶切位点保护碱基的表，基本意思是，就举Acc I 和Afl III 为例吧，我们设计引物的时候，先把引物根 ...
  
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  我想问下是不是限制性内切酶有两个功能域，一个起识别作用，一个起切割作用？

• vvmmoy (2015-4-03 09:56:34)

  
  也不用想得太复杂，这种酶加几个，那种酶加几个，都加三个保护碱基就行

• babybabe (2015-4-03 09:56:54)

  
  保护碱基选择合适的个数，看切割的效率

• caihong (2015-4-03 09:57:17)

  第一列是使用的限制性核酸内切酶的名称，第二列中红色部分为其酶切位点，前面黑色字体为其保护碱基，第三列就是所加保护碱基个数所对应的酶切时间和酶切效率！

• caihong (2015-4-03 09:57:34)

  我想问下是不是限制性内切酶有两个功能域，一个起识别作用，一个起切割作用？
  
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  是的，一般的都是的！