【求助】哪位前辈帮我分析下这张电泳图？

最新回复

• leifengta (2015-1-13 10:38:20)

  
  marker不是很清晰，可能和胶有关系，电泳相关的溶液都重新配了试试，PCR没见到有明显条带， 暂时没法知道PCR是否成功，目的DNA片段是658bp吧？

• toy (2015-1-13 10:40:45)

  
  拖带很严重，建议减少PCR循环次数或者降低模板量。

• nut6694 (2015-1-13 10:41:09)

  
  主要是PCR问题，建议把PCR条件引物Tm值等发上来让大家讨论。

• 33号 (2015-1-13 10:41:38)

  marker不是很清晰，可能和胶有关系，电泳相关的溶液都重新配了试试，PCR没见到有明显条带， 暂时没法知道PC ...
  
  ===========================================================================================================
  
  多谢。marker能跑出清晰的带来的，可能是我用的数码相机拍的照片，不太清楚，电解液什么的都是刚配的。嗯，是658bp，不小心写错了。线粒体上的一段，就是COI基因

• 33号 (2015-1-13 10:42:17)

  拖带很严重，建议减少PCR循环次数或者降低模板量。
  
  =====================================================================================================
  
  嗯，好的，多谢，我试试看。主要是之前一直用这个条件，可以做出来的。可是最近不知怎么回事，条带出来就是这种样子，拖尾很严重

• 33号 (2015-1-13 10:42:49)

  主要是PCR问题，建议把PCR条件引物Tm值等发上来让大家讨论。
  
  ====================================================
  
  先谢了。pcr使用的是50微升体系，Tm值是51°，目的片段是658bp。
  ddH2O                 25.5
  dNTP                    8
  MgCl2                   5
  Buffer(Mg free)       5
  Templete               2
  Primer1                  2
  Primer2                 2
  酶                      0.5
                            50

• xiaoxiaoniao (2015-1-13 10:43:10)

  
  拖带很严重，模板有没有降解呀？

• 33号 (2015-1-13 10:43:43)

  QUOTE:

  原帖由 xiaoxiaoniao 于 2015-1-13 10:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  拖带很严重，模板有没有降解呀？

  这个是提完DNA立马进行PCR的，之前也做过，无论是新提的还是之前提出来的，跑胶的时候都出现拖尾现象，我试了一下之前已经做出来的样品，也是这种现象，让人很郁闷。

• ritou1985 (2015-1-13 10:44:11)

  
  你做多少个循环？我做了35个循环，也出现了和你一样的情况。后来师兄说可能是模板降解了，用新模板做，拖尾就减少了，要不你也试试

• 3648755 (2015-1-13 10:44:37)

  你做的是不是二次PCR？？

• seagate (2015-1-13 10:44:59)

  
  我觉得dNTP没必要那么多。50的体系，如果浓度是10mM，1就足够了。模板一般20-50ng足够，太多的话反而影响产量。

• HP007 (2015-1-13 10:45:34)

  你做多少个循环？我做了35个循环，也出现了和你一样的情况。后来师兄说可能是模板降解了，用新模板做，拖尾 ...
  
  ==============================================
  
  我做的是36个循环，用之前提的跟现在提的都出现了这种状况

• HP007 (2015-1-13 10:47:19)

  你做的是不是二次PCR？？
  
  =============================
  
  不是二次PCR，没纯化过的PCR。。。。

• HP007 (2015-1-13 10:47:37)

  我觉得dNTP没必要那么多。50的体系，如果浓度是10mM，1就足够了。模板一般20-50ng足够，太多的话反而影响产 ...
  
  ====================================================
  
       我用的dNTP是400微升、每种NTP各2.5mM的，有可能是用多了

• feima+ (2015-1-13 10:48:43)

  
  这个就是PCR的问题

• ALALA (2015-1-13 10:49:00)

  你的引物可能特异性不好，最好重新设计一下，完全是拖带，
  

• uaubc (2015-1-13 10:49:39)

  
  拖带严重有木有降解额？建议做个内参

• summerxx (2015-1-13 10:49:58)

  
  PCR和胶都有可能有问题，PCR就慢慢优化吧，胶上MARKER也有拖带，说明胶可能没融化完全，有胶粒在跑起来就拖尾，可以融化时间加长点吧，间歇加热

• zwsyrt (2015-1-13 10:50:15)

  所提DNA用凝胶检测没有？

• baidukk (2015-1-13 10:50:32)

  可能是你的酶有问题，有时候酶质量不高或者使用不当有污染的情况下会发生这种问题，建议加上阳性对照