【求助】western-blot膜上显色所有条带怎么办？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-2-13 17:34 作者: guagua 来源: 分析测试百科网

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【求助】western-blot膜上显色所有条带怎么办？

电泳结束后，用转移缓冲液清洗凝胶。剪一张与胶大小相当的硝酸纤维素膜，用ddH2O处理5 min，再注入转印缓冲液中处理10 min；剪四张比凝胶稍大的滤纸，用转移缓冲液浸湿，将其中两张平铺于电转移装置上，然后将凝胶平铺于滤纸上，用玻璃棒在凝胶上轻轻滚动，赶走气泡；将处理好的PVDF膜平铺一凝胶表面，用玻璃棒在膜上轻轻滚动以除去气泡；将另两张滤纸平铺于硝酸纤维素膜上，并用玻璃棒除气泡，然后将滤纸/凝胶/膜/滤纸/夹层放入电转移装置内，注意凝胶面朝负极；恒压45 V，电转移过夜。
转移完毕后，将硝酸纤维素膜在PBS（pH 7.4）中漂洗2 min；将膜置于封闭液中（含3% BSA的PBS），于25 ℃ 低速振荡封闭2 h；回收封闭液，将膜浸入用含3% BSA的PBS适当稀释的抗His的一抗溶液中（1:1200），25 ℃ 低速振荡2 h；膜用PBS（pH 7.4）先快速洗二次，每次2 min，然后洗三次，每次15 min；把膜转移到用含3% BSA的PBS按1：500稀释的HRP标记的二抗中，于25 ℃低速振荡2 h；膜用PBS（pH 7.4）先快速洗二次，每次2 min，然后洗三次，每次15 min；将膜浸入DAB显色液中，避光显色5分钟；用蒸馏水终止显色反应。
这是我的操作过程。
附件是我的膜的图片。
请大家帮忙分析一下！