查看完整版本请点击这里：
【分享帖】秀出你的western转膜条件
【分享帖】秀出你的western转膜条件
除了抗体原因，转膜是怕是western成败的最关键因素。
看到园子里好多好多人在求助转膜时间，园子为何总结出一系列分子量蛋白转膜的时间呢？少说这对于大多数新手来说，是极好的礼物，说大点，借助丁香园的强势人气，此举可以提高我国一线科研人员WB水平也未必。我认为不用摸转摸条件的话,WB的效率提高数倍不成问题。
请大家多多提供一线转膜经验
也请园子里管事的兄弟姐妹多思量，我希望可以发起一个全园子的征集计划，由本板块版主负责筛选归纳。
[ 本帖最后由 woshiduiyan 于 2013-5-16 17:39 编辑 ]
查看完整版本请点击这里：
【分享帖】秀出你的western转膜条件
【分享帖】秀出你的western转膜条件
最新回复
orangecake (2013-5-16 16:51:43)
对这个方向不大熟悉，但我想应该包括下列几个方面，请战友们费心了，谢谢。
蛋白来源：
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：
WB用膜类型、孔径：
转膜方式（恒压、恒流）：
转膜时间：
转膜设备:
转膜液的配制：（如甲醇的比例和是否加SDS以及多大质量浓度等）
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
zwsyrt (2013-5-16 16:52:02)
蛋白来源： 肌肉细胞膜
蛋白名称（可保密）： ***
蛋白分子量： 50--80 kDa
WB用膜类型、孔径： NC膜/PVDF膜(本次试验的结果选用的是NC膜)
转膜方式（恒压、恒流）： 半干转 恒流50mA
转膜时间： 70 min
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
9900 (2013-5-16 16:52:32)
蛋白名称（可保密）：一些转录因子
蛋白分子量：40~70KD
WB用膜类型、孔径：0.45 NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流400mA
转膜时间：60~90min
PS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要
曾经因为失误，转了15min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别
one (2013-5-16 16:52:54)
蛋白来源：内皮细胞 总蛋白
蛋白名称（可保密）：occludin & AKT
蛋白分子量：65KD & 56KD
WB用膜类型、孔径：0.45 PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 100V
转膜时间：60~70min
同意“ycwzq”所说的“除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要”。
鉴于“wcm123_1980”版主所提的意见，我把目的蛋白名字也秀出来了，设备名字是“Bio-Rad mini”。
2541 (2013-5-16 16:53:30)
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：65KD & 55KD
WB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）
转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒压 12V
转膜时间：30-40min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转；
9900 (2013-5-16 16:54:06)
蛋白来源：293T细胞
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：95KD & 35KD
WB用膜类型、孔径：PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 90V-110V,控制电流不要超过300mA。
转膜时间：70min
eric930 (2013-5-16 16:55:00)
相关疾病：
肿瘤
蛋白来源：肿瘤手术标本
蛋白名称（可保密）：转录因子
蛋白分子量：33KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：350mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
说明：相同条件曾用于数个30-70KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；
实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
eric930 (2013-5-16 16:55:30)
蛋白来源：成纤维细胞
蛋白名称（可保密）：smad3
蛋白分子量：54KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：350mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
IAM007 (2013-5-16 16:55:58)
蛋白来源：胰腺癌细胞
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：16KDa and 42KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：120V 恒压
转膜时间：90 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
98776langtao (2013-5-16 16:56:20)
蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：72KD，42KD 和22KD
WB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26A，两张膜0.3A. 转膜时间: 90min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。
windy+++ (2013-5-16 16:56:41)
蛋白来源：大鼠PBMC
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：55KD
WB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜
转膜方式（恒流）：湿转，转膜时间: 60-90min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了
其实0.22的膜一般不怕转过头 以我们的经验，转膜时间、电压其实
也有很大范围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过
一张膜转，17KD的和170KD的，按照170KD的条件，17KD的转膜也很好的
（没有过头）
49888 (2013-5-16 16:57:02)
蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：大于250kD
WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A. 转膜时间: 180min
设备：“Bio-Rad ”
建议：电转保持电压在70V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。
附一张图，是用数码相机微距拍的。
26704049.snap.jpg
04906 (2013-5-16 16:57:40)
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：28KD
WB用膜类型、孔径：0.45的NC膜
转膜方式（恒流）：湿转，90min，0.25A
设备：“Bio-Rad ”
建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况
tianmei001 (2013-5-16 16:58:03)
蛋白来源：肿瘤细胞
蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白
蛋白分子量：10-200KDa
WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：120v 恒压
转膜时间：120 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景
viviwang1987 (2013-5-16 16:58:34)
蛋白来源：胰腺β细胞
蛋白名称（可保密）：******
蛋白分子量：90-130KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：250mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备: 湿转
bamboo16 (2013-5-16 16:59:01)
蛋白来源：原核表达
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：38KD
WB用膜类型、孔径：0.45 NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压：100V
转膜时间：120min
pengke1983 (2013-5-16 16:59:26)
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：220kDa，130kDa，70kDa,41kDa
WB用膜类型、孔径：PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：70v120min，180min，5-6h
转膜设备:伯乐湿转
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：40kDa一下，70v 60-90min足够，40-70kDa 90-120min即可。
70-120kDa 70v120-180min足够，120-180kDa 180-240min，180kDa以上建议6h
u234 (2013-5-16 16:59:58)
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：53KD
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：80V 100min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
蛋白来源 卵巢癌膜蛋白
蛋白名称（可保密）：磷酸化VEGFR
蛋白分子量：230
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：80V 120min
转膜设备:湿转 Bio-Rad
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
abc816 (2013-5-16 17:00:33)
蛋白名称（可保密）：β-actin
蛋白分子量：42
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：50 4h
转膜设备:湿转 Bio-Rad
图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
52304592.jpg
PCR (2013-5-16 17:00:57)
【分享帖】秀出你的western转膜条件