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【求助】293细胞活力低的原因？有图有真像！

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-1-29 16:14    作者: yjf1026    来源: 分析测试百科网

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【求助】293细胞活力低的原因？有图有真像！
最近买了一株HEK293,培养时，有时看着很好，成梭状，一个个（右图）；有时看着不好看，成块状，好多细胞连一块的感觉，而且碎片黑点很多（左图）。查了ATCC的图片，也是成片的（和左图差不多）。然后，不管哪种形态，用胎盘蓝检测活性，总是只有50-60%的活力。感觉细胞碎片很多，是不是机器在计算细胞活力时，把碎片当成细胞来算，算是死的细胞。这个细胞贴壁效果差，我传代时，都是直接吹下的，没有使用胰蛋白酶，之前用过胰蛋白酶消化，嫌麻烦，现在一直都是直接吹下，直接吹下和胰蛋白酶消化有没有差别。最近，在做puro稳定筛选脂质体转染的293，老是失败。
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293-200倍-高密度-碎片多.jpg


293-200倍-高密度.jpg


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最新回复

  • Ao7 (2015-1-29 16:14:43)

    最好是用胰酶消化后再加完全培养基吹开吧，机械的吹力对细胞伤害比较大，并且必要时需要离心去除一些细胞碎片，不要嫌麻烦了。细胞状态差时很容易出现黑点，并且长出的丝特别少。上面的图感觉像是传代是细胞密度比较稀呢，还是你的细胞死掉了？

  • toy (2015-1-29 16:15:01)

    同意楼上的看法！我经常养293T，细胞状态还可以，包病毒什么的基本没有问题！我是用0.05%的胰酶消化，大概需要10秒，时间视具体情况而定，然后轻轻吹打，尽量使细胞成单个状态。

  • youreyes (2015-1-29 16:15:28)

    右图的细胞已经死了，因素很多。消化时要用消化液的，不能直接吹下。楼上说得对！

  • 49888 (2015-1-29 16:15:47)

    细胞状态好，直接吹是很难吹下来的，用胰酶消化很好的。成块就是因为没吹散，铺的不均匀。细胞状态不好，原因很多，我觉得可能你吹得劲大了吧，再加上新买的，细胞还得适应新环境，另外培养基是什么品牌和型号？

  • mogu (2015-1-29 16:16:06)


    细胞很稀时更换完全培养基   2-3天一换  不要动直到长好为止

  • jiushikeshui371 (2015-1-29 16:16:24)

    新手，不知道怎么发帖，我想问下大家，高表达APP/PS1的细胞有哪些。HEK293 算不算

  • yjf1026 (2015-1-29 16:16:56)

    QUOTE:

    原帖由 49888 于 2015-1-29 16:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    细胞状态好，直接吹是很难吹下来的，用胰酶消化很好的。成块就是因为没吹散，铺的不均匀。细胞状态不好，原因很多，我觉得可能你吹得劲大了吧，再加上新买的，细胞还得适应新环境，另外培养基是什么品牌和型号？
    ...
    培养基是hyclone MEM，血清是hyclone新西兰胎牛血清，血清含量10%。我的这个细胞，有时长的很好，但是不管长的好与不好，只要用培养基或者PBS，轻轻一吹就掉。这也是有次我加胰蛋白酶时，直接将胰蛋白酶用移液管打进去，刚好打到细胞平面上了，我发现平面上的细胞一片被全部吹下了，自此，我决定不用胰蛋白酶了。

  • yjf1026 (2015-1-29 16:17:18)

    QUOTE:

    原帖由 jiushikeshui371 于 2015-1-29 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    新手，不知道怎么发帖，我想问下大家，高表达APP/PS1的细胞有哪些。HEK293 算不算
    APP/PS1是什么？

  • standbyme (2015-1-29 16:17:42)

    用胰酶吧，倒入后30秒后直接弃去胰酶，在显微镜下观察，等到细胞成圆形时，用手一拍，就可以看到细胞成片掉下，此时细胞不仅分散，而且活力很好。关键在掌握消化时间。血清可以从多到少得驯化

  • memory (2015-1-29 16:20:11)

    还是用胰酶吧！尤其是在做转染的时候，这样细胞状态会好点，你才能成功做实验。胰酶消化后的细胞是一个一个的，如果直接吹经常是一片一片的细胞，影响后面的增殖。

  • okhaha (2015-1-29 16:20:25)


    HEK293细胞还是比较好培养的，楼主直接吹下来可能效果不比胰酶消化的好哦

  • xiaoxiaoniao (2015-1-29 16:20:43)

    消化293和293T用的胰酶不加EDTA的，这样稍稍减弱胰酶的消化作用。

  • yueban-1147 (2015-1-29 16:21:08)

    培养基中血清质量必须很好，最好是进口的，而且实验前培养基预热带37度

  • idea2011 (2015-1-29 16:21:28)

    293T最好用进口血清，但是没有的话用国产的也行，就是贴壁不是特别的紧，容易漂，但是操作的时候轻柔一点没什么大问题，包装病毒啥的也都不错！不知道你们怎么复苏的，我们的培养基是DMEM，不要加双抗。复苏的时候不要离心，直接加入大dish，然后加入40ML的培养基，48小时候基本可以长满，可以一天看一次，因为不加双抗所以最怕污染，拿细胞的时候轻柔一些。至于培养基用前需要不需要预热，这个无关紧要，我们实验室不管做什么细胞都不预热培养基，顶多都是在室温放一会就直接用。

  • 土豆potato (2015-1-29 16:21:55)

    最好是用胰酶消化后再加完全培养基吹开吧，机械的吹力对细胞伤害比较大，并且必要时需要离心去除一些细胞碎 ...

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    请问具体要怎样离心去除碎片呢？

  • dragonkilly (2015-1-29 16:22:15)


    293和293T差别很大，我的293消化后一天长的不是很好看，之后慢慢就长好了，满满的
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