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【求助】超滤和过滤技术答疑园地:有问尽管来提
膜分离是在20世纪初出现，20世纪60年代后迅速崛起的一门分离新技术。膜分离技术由于兼有分离、浓缩、纯化和精制的功能，又有高效、节能、环保、分子级过滤及过滤过程简单、易于控制等特征，因此，目前已广泛应用于食品、医药、生物、环保等各个领域。康宁生命科学的过滤、超滤产品在生物医学及制药研究领域有着及其广泛的应用，适合药品及生物制品的澄清、分离、纯化和浓缩等各个环节。【求助】超滤和过滤技术答疑园地:有问尽管来提
本人有多年的膜过滤技术经验，受丁香园和Corning（康宁中国）公司委托，特开超滤和过滤技术答疑园地，对站友们提出的问题给予解答，希望能够和大家相互学习，共同进步。
任何与超滤和过滤有关的实验问题和产品问题，大家尽管在此提出，本人尽力解答，也欢迎站友们来参加讨论。
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最新回复
tuomu45 (2013-10-22 20:36:10)
33号 (2013-10-22 20:36:41)
小游abc (2013-10-25 19:42:37)
能否根据膜材质的不同将过滤的物质分类列表，因为据我所知，有些溶剂如DMSO会溶解某些材质的滤膜。这样将来用得时候只要对照列表就知道过滤时选取相应的滤膜就行。
njkph (2013-10-25 19:44:06)
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感谢您在开题后半小时就关注到该论题！
膜分离技术的条件是膜孔径的大小，该技术是基于膜孔大小对物质进行分离的一种方式，是随着科学技术的发展，近年来日益兴起，并不断发展完善的一门技术。现如今该技术在生命科学领域已经达到非常重要的地位，具有极大的神秘魅力，引发无数的科学技术工作者投身于此。
对于特定的分子量的微生物的膜转运蛋白--膜转运蛋白会因为功能的差异有很多种，所以需要特定--我们可以借助膜技术进行分离纯化，但是膜方法的分离毕竟是粗纯，进一步的纯化需要借助更精细的方法--Chromatography （层析）方法，甚至层析的组合加上膜分离以及其他方法的组合去完成--这就是所谓的下游技术。
想得到更好的结果，需要考虑的因素，除了最重要的分子量的选择外，还需要考虑膜分离时候的条件，比如样品的处理，膜分离时候的跨膜压力，其他还有温度，膜材质的选择。
njkph (2013-10-25 19:44:38)
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我想您测定血浆蛋白结合率，是用某种药物或者活性成分和血浆蛋白在一定条件下，结合一段时间后，然后用超滤膜把小分子的游离药物或活性成分（未结合部分）离心分开，然后测定含量并进而计算结合率的实验。
该实验中膜上应该是和血浆蛋白结合的结合物，血浆蛋白因为分子量大不会离心下去。那么我猜您说的“血浆不能完全滤过”应该是血浆中的液体成分不能完全虑过，那么还有一些游离药物活性成分不能离心下去，所以无法计算。
我的建议是：
1，可以用更稀浓度的血浆液有利于离心，离心后再次加入缓冲液洗滤；
2，选择合适的分子量的膜；
3，增加压力。
供参考，祝成功！
njkph (2013-10-25 19:44:57)
QUOTE:
您给出一个很好的建议！这个问题归属于化学兼容性的问题。
顺着您的问题，我把过滤（超滤）膜使用选择时候需要考虑的因素list如下：
1，分子量大小；Vs蛋白形状类型（球蛋白，纤维蛋白等） Size， 可以参考开题附件“过滤指南”里面的P1表1和P14表3；
2，蛋白吸附；Adsorption可以参考开题附件“过滤指南”里面的P1表2；
3，材料溶出； Extractable， 一般研发时候不在意，但是由研发转入生产的时候需要考虑；
4，化学兼容性：Compatibility 可以参考开题附件“过滤指南”里面的P3表3和P17表6;
5，样品量和流速，影响因素很多：可以参考开题附件“过滤指南”里面的P3表4和P15表4及其前文所述诸多因素;
6, 离心力：可以参考开题附件“过滤指南”里面的P16表5.
综合这些因素，您就可以优化选择康宁的超滤器。各种超滤器特点可以参考开题附件“过滤指南”里面的P5表5和P14表2.
ha111 (2013-10-25 19:45:25)
聚醚砜膜不能高压，那么酒精消毒是否会彻底？有没有细点的指导，比如浸泡的时间，如果需要无菌，不高压灭菌是否影响消毒效果？
zhihui小新 (2013-10-25 19:47:00)
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这个实验我当时做过，楼主所说的问题确实存在，如果加大转速或延长时间的，会使血浆蛋白的温度升高，对实验产生很大的影响，所以如果有能力的话，可以采用低温高速离心机，保证结果的准确。当时我的实验室地龙蛋白，稀释确实是一个不错的方法，但是可能会使你的实验结果中的药物不易检出，小于最低限。
我觉的如果材料足够的话，可以选用平板膜，时间可以很大的节约，而且效果相当好。但由于生物实验，所得样品相当宝贵，所以这个方法只适合其他药品的制备。
离心超滤对膜管得选择也很重要，可以试一下，10k和1k，测定蛋白的保留率，选择合适的膜管。
caihong (2013-10-25 19:47:25)
njkph (2013-10-25 19:49:46)
QUOTE:
大多数的超滤膜不能够耐受高温，所以需要用其他方法进行灭菌。附件文件推荐用70%酒精消毒，或者某些消毒气体进行灭菌。酒精消毒属于一般消毒，灭菌效果当然不能和高温消毒同日而语。但是就方法而言，该方法确实有效。
也可以考虑用NaOH消毒，但是需要考虑的是材质，不是所有的超滤膜材质都能够达到这样的化学兼容性。
njkph (2013-10-25 19:50:09)
QUOTE:
原理一样，但是有诸多不同：1， 应用领域不一样；分别是医学和生命科学；
2，硬件设施不一样；
3， 驱动力不一样；
4，目的不一样；
5，膜不一样；
6， 操作不一样。
c86v (2013-10-25 19:50:50)
请问超滤管接负压抽滤的设备在哪里可以买到？我们这里做纯化的人太多，离心机天天排队用
小野花 (2013-10-25 19:51:22)
超滤膜的尺径范围在不同的资料上得到不同的结果，有说100-1nm的；还有的说500-1nm。我做出的膜层在200-300nm 到底是不是超滤膜啊！
请问更加接近真实的超滤膜范围...谢谢了
了了 (2013-10-25 19:51:51)
以前有用过MILLI 30K的，超滤完后发现30K以下的还是很多，理论上是不是30K以下的要基本上滤出？
njkph (2013-10-25 19:52:38)
QUOTE:
负压抽滤的泵和真空瓶有很多公司可以提供，不知道您要进口产品还是国产产品。您可以和我电邮联系，我给您一些供应商。我得邮箱是wangym@yahoo.cn.我担心这里给您供应商，有做广告的嫌疑。请谅解。
njkph (2013-10-25 19:52:58)
QUOTE:
您的问题很好！很有代表性。这个是关于过滤概念和孔径大小的问题。我下面分别谈谈。过滤从大类上分为死端过滤（Dead Flow Filtration，DFF)和切向流过滤（，也有叫错流Crossflow Filtration, Tangential Flow filtration，TFF).
死端过滤是一个进口一个出口的过滤方式---所谓死端。从作用上看有澄清，稳定和除菌三种。除菌包括食品饮料行业的除菌（0.45um）， 制药行业注射剂除菌（0.22um）， 除支原体（0.1um），除病毒。这些孔径都是微米级别。
切向流过滤是一进口两出口的方式，出口分别是透过口--小于膜孔的成分的出口， 和回流口--大多数是大于膜孔的成分的出口。所以叫错流或切向流。
根据孔径的大小，切向流分为微滤和超滤2种方式。微滤是微米级别孔径的分离，超滤是分子量级别的分离。
微米大小比较清楚，一般的澄清都是微米级别的。
超滤是分子量级别的，那么如何折算成纳米级别的？这个只能是一个近似的计算，因为蛋白质的分子形状不一样，球形，纤维性状和椭圆形状的差异导致分子大小的差异。如何换算大小就成为麻烦，因为有不确定。大体上---很粗的数据--大约9万分子量相当于1nm。注意这个数据仅供参考啊。
您说的200~300nm，属于微滤范畴， 也就是0.2-0.3um，但是可以用切向流的方式去处理。
njkph (2013-10-25 19:53:28)
QUOTE:
很好的问题，可以解决大家关于截留率的疑问。对于MWCO 30K的膜，其意义是对于30K的球状目标物质大约有90%的截留。那么如何达到近似100%截留？一般说来，用1/6~1/3目标物质的分子量作为孔径。
同样的，对于希望去除的小分子，孔径也需要选择3-6倍目标物质。当然越小越好！同时我们还有考虑小分子穿过膜的动力学状态，小分子穿膜也有速率的问题。毕竟水分子更快地穿过的。所以有时候为了更好的去除小分子，需要反复的加缓冲液洗滤（Diafiltration）。我曾经试验过氯离子的去除，用1K膜反复洗滤12个周期， 才达到0.1M Ag+检不出。
junhun (2013-10-25 19:54:12)
对于MWCO 30K的膜，其意义是对于30K的球状目标物质大约有90%的截留。那么如何达到近似100%截留？一般说来，用3-6倍目标物质的分子量作为孔径。
同样的，对于希望去除的小分子，孔径也需要选择1/6~1/3目标物质。当然越小越好！同时我们还有考虑小分子穿过膜的动力学状态，小分子穿膜也有速率的问题。毕竟水分子更快地穿过的。所以有时候为了更好的去除小分子，需要反复的加缓冲液洗滤（Diafiltration）。我曾经试验过氯离子的去除，用1K膜反复洗滤12个周期， 才达到0.1M Ag+检不出。
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用3-6倍目标物质的分子量作为孔径。-----------------这个说反了吧？？？？？应该是1/6~1/3目标物质
对于希望去除的小分子，孔径也需要选择1/6~1/3目标物质。当然越小越好？？？？？？？？应该是3-6倍目标物质-----不知道我说的对不对，请指教，谢谢！
#问号# (2013-10-25 19:55:18)
我想分离两个蛋白，分别大小为22和45kd左右，目标是纯化22kd的，请问我要用多大孔径的膜？
xueyouzhang (2013-10-25 19:56:01)
LZ你好，我想把我通过胃蛋白酶切好的F(ab)2和Fc fragments分开，但是比较微量，40ug溶在500ulPBS中，请问可以用怎么样规格的超滤管去除Fc并浓缩？谢谢！
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