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改良J-G法测定总胆红素和结合胆红素（二）
关键词：有证标准物质 食品安全检测 环保标准物质 进口标准物质改良J-G法测定总胆红素和结合胆红素（二）
【临床意义】
1．血清总胆红素测定的意义
(1)黄疸及黄疸程度的鉴别：总胆红素浓度达到17．1～34．2μmol／L时为隐性黄疸。总胆红素浓度大于34．2μmol／L时为黄疸。
(2)肝细胞损害程度和预后的判断：总胆红素浓度明显升高反映有严重的肝细胞损害。但某些疾病如胆汁淤积型肝炎时，尽管肝细胞受累较轻，但是血清总胆红素可升高。
(3)新生儿溶血症：血清总胆红素有助于了解疾病严重程度。
(4)再生障碍性贫血及数种继发性贫血(主要见于癌或慢性肾炎引起)，血清总胆红素减少。
2．血清结合胆红素测定的意义结合胆红素与总胆红素比值可用于鉴别黄疸类型。
(1)比值<2%，见于溶血性黄疸、阵发性血红蛋白尿、恶性贫血及红细胞增多症等。
(2)比值40%～60%，主要见于肝细胞性黄疸。
(3)比值>60%，主要见于阻塞性黄疸。
但以上几类黄疸，尤其是肝细胞性黄疸、阻塞性黄疸之间有重叠。
【注意事项】
1．配制标准液的胆红素须符合下列标准：纯胆红素的氯仿溶液，在25℃条件下，光径1．0cm，波长453nm，ε应在(60700士1600)L／(cm·mol)范围内。
2．胆红素对光敏感，阳光照射可使其氧化，对光的敏感度与温度有关，标准液及标本均应尽量避光置冰箱保存。
3．轻度溶血对本法无影响，但严重溶血时可使测定结果偏低。其原因是血红蛋白与重氮试剂反应形成的产物可破坏偶氮胆红素，还可被亚硝酸氧化为高铁血红蛋白而干扰吸光度测定。血脂及脂溶色素对测定有干扰，应空腹采血。
4．叠氮钠能破坏重氮试剂，终止偶氮反应。凡用叠氮钠作防腐剂的质控血清，可引起偶氮反应不完全，甚至不呈色。
5．标本对照管的吸光度一般很接近，若遇标本量很少时可不做标本对照管，参照其他标本对照管的吸光度。
6．结合胆红素测定在临床上方法不同，反应时间不同，结果相差很大。时间短、未结合胆红素参与反应少，结合胆红素反应也不完全；时间长，结合胆红素反应较完全，但一部分未结合胆红素也参与反应。
【评价与思考】
1．测定胆红素的方法有高效液相色谱法、重氮法、氧化法、干化学法等。临床常用方法为氧化法和重氮法。重氮法包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法等；氧化法包括氧化酶法、化学氧化法。测定胆红素经典方法是改良J-G法，缺点是不能自动化；氧化酶法特异性和准确度均较好，能自动化分析。
2．正常胆红素浓度时精密度较差，特别是批间CV为14％～20％；当胆红素为342μmol／L时，精密度好，批内CV为0．95％，批间CV为5％～10％。
3．本法ε为74 380L／(cm·mo1)，标本中胆红素为17．1μmol／L时的吸光度约0．08(血清用量0．2m1)，正常或病理血清总胆红素<17．1μmol／L时，手工法测定灵敏度较低。分析仪检测灵敏度高得多，最低吸光度可测至0．02，线性上限可达342μmol／L；但操作需多次加试剂，一般无法在全自动生化分析仪中使用。
4．重氮反应法测定胆红素，可用甲醇(M-E法)或二甲亚砜等作加速剂，做成单一试剂，反应pH和显色：pH都在酸性，560nm波长比色，易于自动化。但灵敏度比改良J-G法略低，M-E法ε为60 500L／(cm·mo1)，．Hb干扰较明显。
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改良J-G法测定总胆红素和结合胆红素（二）
改良J-G法测定总胆红素和结合胆红素（二）