查看完整版本请点击这里：
【分享帖】细胞爬片
【分享帖】细胞爬片
进实验室这么长时间了，每一天都好像过得很艰难，每一项实验的完成都很辛苦，其中的每一个细节都不能大意，不然做得一切都要前功尽弃。
实验室里没有人做细胞爬片，我连见都没见过，老板的实验却要求这个东西，只能自己摸索。查资料 搜信息，自己实践，终于做出了可以用来后期实验的细胞爬片。现总结经验如下：
首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗净，烤干，置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用。
爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可，我选择在培养皿中爬。一为节约经费（培养皿可以重复利用）二来觉得培养皿口大，操作比较方便。培养皿消毒同上，消毒时记得消两把镊子
具体操作是：用胰酶消化好细胞，充分吹打，使之成单细胞悬液（注意：这一点很重要，关系到将来爬出来片子的质量）
取出消毒的培养皿，可以先加少量培养基（以使玻片与培养皿紧密接触），将玻片小心放入摆放其中，然后将单细胞悬液一滴一滴的滴到玻片上。最后盖上培养皿置于37度5％CO2的暖箱中培养，根据细胞生长状况，24小时或更长时间适时取出爬片。
爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒钟，然后在4％多聚甲醛中固定15分钟，然后再用37度去离子水将甲醛冲干净，注意手法轻柔，要不然掉片很厉害。同时操作过程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功尽弃。
将做好的爬片置于滤纸上晾干，然后用中性树胶粘在载玻片上。注意一定要等中性树胶彻底干了之后才能做后续实验，要不然玻片会掉下来的，就又是前功尽弃了 做好的细胞爬片可以放在－20保存备用，具体能保存多长时间不太清楚，当然尽量早用。
查看完整版本请点击这里：
【分享帖】细胞爬片
【分享帖】细胞爬片
最新回复
bangqi_k (2015-6-09 19:51:43)
谢谢！请问楼主，照上述的方法的意思，是不是只要把细胞悬液薄薄的覆盖盖玻片就行了啊 》？还是也要像普通培养细胞的过程一样加入相应要求量的培养基呢？
wzqzy (2015-6-09 19:52:14)
楼主整理的很仔细啊，先谢过了
有个提议啊，大家在切割玻片的时候，可以在玻片的某个角落做个几号 ，比如在右上角打个缺口，这样使用的时候只要保证缺口在右上角，就不会把片子弄反了，省去很多麻烦哦^_^
prettygirl@ (2015-6-09 19:52:50)
细胞封片时细胞面朝下，楼主没做之前保存就封片，以后做再把他弄下来吗？
ending (2015-6-09 19:53:07)
是啊，那么早封片，后续步骤怎么做啊，再想办法把树脂去掉么？
bring (2015-6-09 19:53:23)
我做的爬片老是两面有细胞,我夜是先滴一点培养基在培养皿里 ,然后再加细胞的,到底该怎么做才能爬一面呀?
HPLC使者 (2015-6-09 19:53:40)
急问：细胞爬片时，将细胞悬液滴在血盖片上，该滴几滴？是不是不要超过血盖片的边缘？如果是这样的话，多长时间后再补足含血清的培养基。
standbyme (2015-6-09 19:53:57)
我是打算做包涵体的染色。在培养细胞的时候在6孔板的底部置玻片，接毒后取出染色。LZ爬片的时候会不会出现两面都有细胞啊~~~
viviwang1987 (2015-6-09 19:54:13)
用24孔板比较好些，在加细胞前先用PBS泡板一会效果很好，呵呵，试试吧
tianmei001 (2015-6-09 19:54:40)
细胞爬片时盖玻片的两面都有细胞有影响吗？我是觉得没有啊，反正最后咱们要的是一面就可以了啊？我是新手，请各位多多赐教！！！
bangqi_k (2015-6-09 19:55:04)
zbboom (2015-6-09 19:55:21)
载玻片太厚，对培养以及培养液都是很浪费，故用薄薄的盖玻片，还有LZ怎么只发帖都会不回答我们的提问，要知道看了你的方法后对我们有启发，但是有些问题还是需要指点的。
cbou876 (2015-6-09 21:14:27)
玻璃片铺胶（15-30万的多聚赖氨酸）风干以后在种植细胞，这样细胞从玻璃片上滑落的就少的多。
供参考！
gogo (2015-6-09 21:14:51)
为什么不用多聚赖氨酸包被呢？
yapuyapu (2015-6-09 21:15:09)
谢谢分享，我是要做免疫荧光的。直接买的现成的爬片，八十多一包五十片。刚开始，算是预实验，只是细胞有两面，摸索着看看吧。楼主的信息还是很有用的
dmg (2015-6-09 21:15:28)
请问下，多聚赖氨酸包被的爬片能吸住死细胞不？因为我是做坏死和凋亡的。。。求解答！
cbou876 (2015-6-09 21:16:34)
=======================================================
八十多一包五十片，请问在哪家公司买的，什么牌子的，多谢！
nikun230 (2015-6-09 21:17:14)
感谢楼主，不知道两面都有细胞到底有没有影响啊？
tie8 (2015-6-09 21:17:47)
相关疾病：
先天性卵巢发育不全综合征
WHB公司供应（无菌，贴壁处理，拆开即用，100片/盒）
24孔板专用的细胞爬片（防脱玻片）：cuturl('http://www.biomart.cn/infosupply/8445630.htm')
12孔板专用的细胞爬片（防脱玻片）：cuturl('http://www.biomart.cn/infosupply/8445628.htm')
6 孔板专用的细胞爬片（防脱玻片）：cuturl('http://www.biomart.cn/infosupply/8445629.htm')
85302138.snap.jpg
NBA (2015-6-09 21:18:36)
46XX性发育睾丸疾病
================================================
八十多一包五十片，请问在哪家公司买的，什么牌子的，多谢！
===============================================================
北京博泰斯生物技术有限公司，电话010-63834601，,62812665
wanglaoshi (2015-6-09 21:18:53)
我和楼主的情况差不多啊，细胞怕片也是要自己摸索来做的，谢谢楼主能给出这么详细的实验经验，非常感谢！
【分享帖】细胞爬片